中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
3期
33-36
,共4页
吕茂杰%陈建飞%时洪艳%冯力
呂茂傑%陳建飛%時洪豔%馮力
려무걸%진건비%시홍염%풍력
Vero E6细胞%B23.1基因%重组蛋白%反应活性
Vero E6細胞%B23.1基因%重組蛋白%反應活性
Vero E6세포%B23.1기인%중조단백%반응활성
应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901 bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失.将其进行BamH I和Xho Ⅰ双酶切,而后定向克隆到经相同双酶切的pGEX-6p-1载体中,构建的重组质粒命名为pGEX-6p-B23.1；将该质粒转化入大肠杆菌BL21( DE3)中,在IPTG诱导下进行表达；SDS- PAGE结果表明,表达出与预期大小相符的约68 ku的重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式存在；Western blotting分析结果表明,表达的重组蛋白与B23蛋白单克隆抗体有很好的反应活性.
應用RT-PCR技術,利用含有酶切位點的上、下遊引物擴增得到Vero E6細胞中編碼B23.1蛋白的基因片段,併進行序列測定及分析,結果錶明,B23.1基因含有一箇長901 bp的開放閱讀框(ORF),未髮現堿基的插入和缺失.將其進行BamH I和Xho Ⅰ雙酶切,而後定嚮剋隆到經相同雙酶切的pGEX-6p-1載體中,構建的重組質粒命名為pGEX-6p-B23.1；將該質粒轉化入大腸桿菌BL21( DE3)中,在IPTG誘導下進行錶達；SDS- PAGE結果錶明,錶達齣與預期大小相符的約68 ku的重組蛋白,重組蛋白主要以包涵體形式存在；Western blotting分析結果錶明,錶達的重組蛋白與B23蛋白單剋隆抗體有很好的反應活性.
응용RT-PCR기술,이용함유매절위점적상、하유인물확증득도Vero E6세포중편마B23.1단백적기인편단,병진행서렬측정급분석,결과표명,B23.1기인함유일개장901 bp적개방열독광(ORF),미발현감기적삽입화결실.장기진행BamH I화Xho Ⅰ쌍매절,이후정향극륭도경상동쌍매절적pGEX-6p-1재체중,구건적중조질립명명위pGEX-6p-B23.1；장해질립전화입대장간균BL21( DE3)중,재IPTG유도하진행표체；SDS- PAGE결과표명,표체출여예기대소상부적약68 ku적중조단백,중조단백주요이포함체형식존재；Western blotting분석결과표명,표체적중조단백여B23단백단극륭항체유흔호적반응활성.
