CAJ | 학술논문

为了寻找日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj)新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究,用Sj雌虫抗原免疫家兔制备血清,对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的新基因(命名为Sj-F1,GenBank登录号为AY261995)克隆入原核表达载体pTWIN1和真核表达载体pcDNA3,经PCR、限制性酶切筛选和鉴定阳性重组子.将pTWIN1/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2566,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白(rSj-F1/intein2),并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blot)分析鉴定.将pcDNA3/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2502,大量制备DNA疫苗.用重组融合蛋白和DNA疫苗免疫小鼠,末次免疫后2周用Sj尾蚴进行攻击感染.感染后42天剖杀冲虫,计算减虫率和减卵率.感染前采血用ELISA法检测抗体.免疫保护效果测定显示:重组蛋白疫苗以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫分别获得了28.07%、24.69%的减虫率和48.30%、46.38%的减卵率;DNA疫苗(pcDNA3/Sj-F1)单独免疫获得了18.47%的减虫率和35.06%的减卵率;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经皮下加强免疫,减虫率和减卵率分别提高到了40.42%和56.17%;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经黏膜加强免疫,减虫率和减卵率增高更明显,分别提高到了42.38%和62.87%.结果表明,Sj-F1重组蛋白疫苗及DNA疫苗均可诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力,两者联合免疫保护效果优于单一疫苗.
위료심조일본혈흡충(Schistosomajaponicum,Sj)신적역묘후선기인병진행면역효과연구,용Sj자충항원면역가토제비혈청,대Sj성충cDNA문고진행면역사선,장획득적신기인(명명위Sj-F1,GenBank등록호위AY261995)극륭입원핵표체재체pTWIN1화진핵표체재체pcDNA3,경PCR、한제성매절사선화감정양성중조자.장pTWIN1/Sj-F1질립전화대장간균ER2566,재저온화저IPTG농도하유도표체가용성중조융합단백(rSj-F1/intein2),병경SDS-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화단백질인적(Western blot)분석감정.장pcDNA3/Sj-F1질립전화대장간균ER2502,대량제비DNA역묘.용중조융합단백화DNA역묘면역소서,말차면역후2주용Sj미유진행공격감염.감염후42천부살충충,계산감충솔화감란솔.감염전채혈용ELISA법검측항체.면역보호효과측정현시:중조단백역묘이FCA작좌제경피하면역화이각취당작좌제경점막면역분별획득료28.07%、24.69%적감충솔화48.30%、46.38%적감란솔;DNA역묘(pcDNA3/Sj-F1)단독면역획득료18.47%적감충솔화35.06%적감란솔;용DNA역묘계동면역후용중조단백역묘경피하가강면역,감충솔화감란솔분별제고도료40.42%화56.17%;용DNA역묘계동면역후용중조단백역묘경점막가강면역,감충솔화감란솔증고경명현,분별제고도료42.38%화62.87%.결과표명,Sj-F1중조단백역묘급DNA역묘균가유도소서산생부분항혈흡충감염적보호력,량자연합면역보호효과우우단일역묘.