南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
4期
509-512
,共4页
柳玉红%李建明%周军%丁彦青
柳玉紅%李建明%週軍%丁彥青
류옥홍%리건명%주군%정언청
RNA干扰%慢病毒%PRL-3%结直肠癌
RNA榦擾%慢病毒%PRL-3%結直腸癌
RNA간우%만병독%PRL-3%결직장암
目的 构建PRL-3基因慢病毒干扰载体及建立PRL-3基因稳定干扰的结直肠癌细胞亚系.为PRb-3基因功能研究奠定基础.方法 设计PRL-3基因特异性RNAi靶序列,与pENTRTM/U6线性载体定向连接,构建pENTRTM/U6真核入门表达载体.通过与pENTRTM/U6 entry clone与pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST载体进行重组,获得pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体.利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染大肠癌细胞株SW480细胞,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰PRL-3基因的细胞亚系.结果 成功构建PRL-3 pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为6×105U/L.RT-PCR、Western blotting结果 表明,克隆1 PRL-3mRNA及蛋白显著降低.结论 成功构建人PRL-3基因特异性的慢病毒干扰载体,获得PRL-3基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系.
目的 構建PRL-3基因慢病毒榦擾載體及建立PRL-3基因穩定榦擾的結直腸癌細胞亞繫.為PRb-3基因功能研究奠定基礎.方法 設計PRL-3基因特異性RNAi靶序列,與pENTRTM/U6線性載體定嚮連接,構建pENTRTM/U6真覈入門錶達載體.通過與pENTRTM/U6 entry clone與pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST載體進行重組,穫得pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真覈錶達慢病毒榦擾載體.利用包裝細胞293FT穫得重組的慢病毒,感染大腸癌細胞株SW480細胞,殺稻瘟菌素篩選穫得穩定榦擾PRL-3基因的細胞亞繫.結果 成功構建PRL-3 pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真覈錶達慢病毒榦擾載體併穫得相應的慢病毒,病毒懸液的滴度為6×105U/L.RT-PCR、Western blotting結果 錶明,剋隆1 PRL-3mRNA及蛋白顯著降低.結論 成功構建人PRL-3基因特異性的慢病毒榦擾載體,穫得PRL-3基因穩定榦擾的大腸癌細胞亞繫.
목적 구건PRL-3기인만병독간우재체급건립PRL-3기인은정간우적결직장암세포아계.위PRb-3기인공능연구전정기출.방법 설계PRL-3기인특이성RNAi파서렬,여pENTRTM/U6선성재체정향련접,구건pENTRTM/U6진핵입문표체재체.통과여pENTRTM/U6 entry clone여pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST재체진행중조,획득pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST진핵표체만병독간우재체.이용포장세포293FT획득중조적만병독,감염대장암세포주SW480세포,살도온균소사선획득은정간우PRL-3기인적세포아계.결과 성공구건PRL-3 pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST진핵표체만병독간우재체병획득상응적만병독,병독현액적적도위6×105U/L.RT-PCR、Western blotting결과 표명,극륭1 PRL-3mRNA급단백현저강저.결론 성공구건인PRL-3기인특이성적만병독간우재체,획득PRL-3기인은정간우적대장암세포아계.
