带核定位信号的RARα与JTV1蛋白相互作用的验证实验
대핵정위신호적RARα여JTV1단백상호작용적험증실험
Identification of the Interactions Between JTV1 and NLS-RARα in vivo and in vitro
  • 万方数据
    四川大学学报（医学版） 사천대학학보（의학판）
    JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
    2009年 3期 382-384,402 ,共4页

    王翀%王东生%刘北忠%郝坡%刘畅%金丹婷%钟梁%王春光

    왕충%왕동생%류북충%학파%류창%금단정%종량%왕춘광

    NLS-RARα%JTV1%酵母双杂交%免疫共沉淀%蛋白质相互作用 NLS-RARα%JTV1%酵母雙雜交%免疫共沉澱%蛋白質相互作用
    NLS-RARα%JTV1%효모쌍잡교%면역공침정%단백질상호작용
    目的 通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用.方法 将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术在体外验证二者之间的相互作用.结果 NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹检测,可以检测到Myc-JTV1蛋白.结论 利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术验证了NLS-RARα与JTV1间存在相互作用.
    목적 통과실험험증대유핵정위신호적유갑산수체α(NLS-RARα)여JTV1단백지간적상호작용.방법 장표체NLS-RARα유이단백화JTV1파단백적량충중조표체질립공전화AH109효모균,통과일대일적효모쌍잡교기술험증량자재활세포내적상호작용;구건NLS-RARα급JTV1단백표첨융합표체재체병공전염인배신293세포,이용면역공침정기술재체외험증이자지간적상호작용.결과 NLS-RARα유이단백화JTV1파단백질립공전화AH109효모균후,가견람색양성극륭;NLS-RARα급JTV1단백표첨융합표체재체구건성공,공전염293세포,항HA다극륭항체침정HA-NLS-RARα상호작용단백복합물후,용항Myc단극륭항체진행면역인적검측,가이검측도Myc-JTV1단백.결론 이용효모쌍잡교화면역공침정기술험증료NLS-RARα여JTV1간존재상호작용.
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