天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2011年
9期
813-816
,共4页
罗远材%瞿全新%糜若然%张灏
囉遠材%瞿全新%糜若然%張灝
라원재%구전신%미약연%장호
人乳头瘤病毒18%癌基因%RNA干扰%质粒%转染%HeLa细胞%逆转录聚合酶链反应
人乳頭瘤病毒18%癌基因%RNA榦擾%質粒%轉染%HeLa細胞%逆轉錄聚閤酶鏈反應
인유두류병독18%암기인%RNA간우%질립%전염%HeLa세포%역전록취합매련반응
目的:构建含有靶向人乳头瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体.方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连人pGCSIL-GFP质粒,构建并鉴定含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA;将重组质粒pGC-shRNA和病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,进行病毒包装,收集病毒液并进行浓缩、纯化；所得病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度,并验证其对宫颈癌HeLa细胞HPV18E6癌基因的干扰效果.结果:HPVISE6的shRNA干扰序列与人类基因组没有同源性,此插入序列转录后得到的RNA二级结构能形成发夹状结构；重组质粒pGC-shRNA经PCR鉴定及DNA测序结果显示该重组质粒构建成功；成功对病毒进行包装、浓缩及纯化后,所得病毒滴度为3×108TU/mL,并能很好地抑制HPV18E6癌基因的表达.结论:成功构建了HPV 18E6-RNAi-LV慢病毒载体,为后续RNA干扰研究的开展提供了工具.
目的:構建含有靶嚮人乳頭瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短髮夾結構RNA(shRNA)的慢病毒載體.方法:根據HPV18E6癌基因的相關信息,設計併閤成shRNA榦擾序列,連人pGCSIL-GFP質粒,構建併鑒定含有shRNA的重組質粒pGC-shRNA;將重組質粒pGC-shRNA和病毒包裝質粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共轉染293T細胞,進行病毒包裝,收集病毒液併進行濃縮、純化；所得病毒液感染293T細胞,測定病毒滴度,併驗證其對宮頸癌HeLa細胞HPV18E6癌基因的榦擾效果.結果:HPVISE6的shRNA榦擾序列與人類基因組沒有同源性,此插入序列轉錄後得到的RNA二級結構能形成髮夾狀結構；重組質粒pGC-shRNA經PCR鑒定及DNA測序結果顯示該重組質粒構建成功；成功對病毒進行包裝、濃縮及純化後,所得病毒滴度為3×108TU/mL,併能很好地抑製HPV18E6癌基因的錶達.結論:成功構建瞭HPV 18E6-RNAi-LV慢病毒載體,為後續RNA榦擾研究的開展提供瞭工具.
목적:구건함유파향인유두류병독18형E6암기인(HPV18E6)적단발협결구RNA(shRNA)적만병독재체.방법:근거HPV18E6암기인적상관신식,설계병합성shRNA간우서렬,련인pGCSIL-GFP질립,구건병감정함유shRNA적중조질립pGC-shRNA;장중조질립pGC-shRNA화병독포장질립pHelper 1.0、pHelper 2.0공전염293T세포,진행병독포장,수집병독액병진행농축、순화；소득병독액감염293T세포,측정병독적도,병험증기대궁경암HeLa세포HPV18E6암기인적간우효과.결과:HPVISE6적shRNA간우서렬여인류기인조몰유동원성,차삽입서렬전록후득도적RNA이급결구능형성발협상결구；중조질립pGC-shRNA경PCR감정급DNA측서결과현시해중조질립구건성공；성공대병독진행포장、농축급순화후,소득병독적도위3×108TU/mL,병능흔호지억제HPV18E6암기인적표체.결론:성공구건료HPV 18E6-RNAi-LV만병독재체,위후속RNA간우연구적개전제공료공구.
