细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2003年
6期
538-540
,共3页
孟晓静%林来兴妹%孟民杰%胡志明%王小宁
孟曉靜%林來興妹%孟民傑%鬍誌明%王小寧
맹효정%림래흥매%맹민걸%호지명%왕소저
HLA-A2重链HC%β2微球蛋白%HLA-A 2-肽组装复合体%表达%纯化
HLA-A2重鏈HC%β2微毬蛋白%HLA-A 2-肽組裝複閤體%錶達%純化
HLA-A2중련HC%β2미구단백%HLA-A 2-태조장복합체%표체%순화
目的: 诱导表达HLA-A2的两个亚基-重链(HC)和轻链β2m, 并将其纯化产物和特异性肽段结合为HLA-A2-肽复合体.方法: 将HC工程菌和β2m工程菌经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h.经超声破菌及专利技术处理获得精制包涵体, 再复性、超滤浓缩后, 用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进行纯化.然后, 将HC、β2m与两条特异性肽段分别结合, 用Superdex 75凝胶过滤纯化, 并用其天然结构的单克隆抗体(mAb)W6/32进行初步鉴定.结果: HC工程菌和β2m工程菌诱导表达的水平分别为43%和47%, HC和β2m纯化后的纯度均达到95%.两条特异性肽段与HC和β2m可组装成HLA-A2-肽复合体, 纯化的HLA-A2-肽复合物在4℃可保存2个月左右, 并可与mAb W6/32特异性结合.结论: HLA-A2的HC工程菌和轻链β2m工程菌均具有较高的表达水平, 与相应的特异性肽段可形成稳定的可溶性HLA-A2-肽复合物, 为进一步研究细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的识别和应答奠定了基础.
目的: 誘導錶達HLA-A2的兩箇亞基-重鏈(HC)和輕鏈β2m, 併將其純化產物和特異性肽段結閤為HLA-A2-肽複閤體.方法: 將HC工程菌和β2m工程菌經0.5 mmol/L IPTG誘導5 h.經超聲破菌及專利技術處理穫得精製包涵體, 再複性、超濾濃縮後, 用DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換層析進行純化.然後, 將HC、β2m與兩條特異性肽段分彆結閤, 用Superdex 75凝膠過濾純化, 併用其天然結構的單剋隆抗體(mAb)W6/32進行初步鑒定.結果: HC工程菌和β2m工程菌誘導錶達的水平分彆為43%和47%, HC和β2m純化後的純度均達到95%.兩條特異性肽段與HC和β2m可組裝成HLA-A2-肽複閤體, 純化的HLA-A2-肽複閤物在4℃可保存2箇月左右, 併可與mAb W6/32特異性結閤.結論: HLA-A2的HC工程菌和輕鏈β2m工程菌均具有較高的錶達水平, 與相應的特異性肽段可形成穩定的可溶性HLA-A2-肽複閤物, 為進一步研究細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的識彆和應答奠定瞭基礎.
목적: 유도표체HLA-A2적량개아기-중련(HC)화경련β2m, 병장기순화산물화특이성태단결합위HLA-A2-태복합체.방법: 장HC공정균화β2m공정균경0.5 mmol/L IPTG유도5 h.경초성파균급전리기술처리획득정제포함체, 재복성、초려농축후, 용DEAE Sepharose Fast Flow음리자교환층석진행순화.연후, 장HC、β2m여량조특이성태단분별결합, 용Superdex 75응효과려순화, 병용기천연결구적단극륭항체(mAb)W6/32진행초보감정.결과: HC공정균화β2m공정균유도표체적수평분별위43%화47%, HC화β2m순화후적순도균체도95%.량조특이성태단여HC화β2m가조장성HLA-A2-태복합체, 순화적HLA-A2-태복합물재4℃가보존2개월좌우, 병가여mAb W6/32특이성결합.결론: HLA-A2적HC공정균화경련β2m공정균균구유교고적표체수평, 여상응적특이성태단가형성은정적가용성HLA-A2-태복합물, 위진일보연구세포독성T림파세포(CTL)적식별화응답전정료기출.
