CAJ | 학술논문

对从环境样品中分离的亚硝酸细菌(Ammonia-oxidizing bacteria)amoA基因进行克隆与测序,为构建基因工程菌打下基础.采用亚硝酸细菌选择性培养基,从4个不同的畜牧养殖污水处理厂采集的样品(分别编号为1,2,3,4)在室温下富集培养2个月后,采取酚氯仿抽提的方法提取DNA.根据已报道的亚硝化单胞菌(Nitrosomonas sp.)amoA基因序列,设计引物AMOB/AMOE,并在AMOB,AMOE的5′-端分别加上了BamHⅠ和HindⅢ的限制性酶切位点,以利于进一步酶切和克隆.用AMOB/AMOE对4种样品的DNA进行PCR扩增,PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析.结果表明,4种样品中1号和3号样品扩增得到预期长度的DNA片段,2号和4号样品扩增没有得到预期片段.回收纯化PCR产物与pGEM-T载体连接,构建amoA基因测序载体,并转化E.coli M15.测序结果提交GenBank进行Blast分析.结果显示,扩增得到的DNA片段均与Nitrosomonas sp.GH22的amoA基因有99.7%的同源性,可从环境中分离的亚硝酸细菌中克隆出amoA基因.
대종배경양품중분리적아초산세균(Ammonia-oxidizing bacteria)amoA기인진행극륭여측서,위구건기인공정균타하기출.채용아초산세균선택성배양기,종4개불동적축목양식오수처리엄채집적양품(분별편호위1,2,3,4)재실온하부집배양2개월후,채취분록방추제적방법제취DNA.근거이보도적아초화단포균(Nitrosomonas sp.)amoA기인서렬,설계인물AMOB/AMOE,병재AMOB,AMOE적5′-단분별가상료BamHⅠ화HindⅢ적한제성매절위점,이리우진일보매절화극륭.용AMOB/AMOE대4충양품적DNA진행PCR확증,PCR산물진행경지당응효전영분석.결과표명,4충양품중1호화3호양품확증득도예기장도적DNA편단,2호화4호양품확증몰유득도예기편단.회수순화PCR산물여pGEM-T재체련접,구건amoA기인측서재체,병전화E.coli M15.측서결과제교GenBank진행Blast분석.결과현시,확증득도적DNA편단균여Nitrosomonas sp.GH22적amoA기인유99.7%적동원성,가종배경중분리적아초산세균중극륭출amoA기인.