CAJ | 학술논문

背景与目的:腺相关病毒(adeno-associated virus)作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗研究.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosis.inducing ligand,TRAIL)基因可迅速诱导多种肿瘤细胞的凋亡.是一个安全有效的肿瘤杀伤基因.本研究旨在构建能在肿瘤细胞内特异性表达TRAIL基因的靶向腺相关病毒,并探讨其体外抗肿瘤效应的可能机制.方法:利用肿瘤特异性启动子端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcfiptase,hTERT)构建特异性杀伤肿瘤细胞的腺相关病毒载体pAAV-hTERT-TRAIL.通过与pAAV-Rc、pHelper共转染HEK293细胞包装出病毒AAV-hTERT-TRAIL.将该病毒体外转染人结肠癌SW620细胞、人肝癌HepG2细胞、人肺癌A549细胞和正常细胞NHLF、MRC5后,检测TRAIL基因的肿瘤特异性表达.MTT法检测其对细胞增殖的影响,ELISA、Western blot法以及流式细胞仪检测细胞的凋亡,并分析其体外抗肿瘤效应的可能机制.结果:成功包装出病毒AAVhTERT-TRAIL.RT-PCR、Western blot和免疫组化法均证实AAV-hTERT-TRAIL能介导TRAIL基因在肿瘤细胞内特异性表达,但在正常细胞内不表达.以100 MOI AAV-IlTERTTRAIL感染细胞96 h后,SW620、A549和HepG2细胞的增殖率分别是41.55%、44.29%、49.95%,NHLF和MRC5细胞的增殖率分别是84.59%和87.22%.Western blot检测发现AAV-hTERT-TRAIL可激活Caspase通路.流式细胞仪和ELISA方法检测证实AAV-hTERT-TRAIL可诱导细胞凋亡.结论:hTERT的存在增强了腺相关病毒所携带TRAIL基因表达的肿瘤靶向性和对正常细胞的安全性.由它调控的杀伤基因可介导肿瘤细胞特异性的细胞毒效应.
배경여목적:선상관병독(adeno-associated virus)작위재체이피엄범용우종류적기인치료연구.종류배사인자상관조망유도배체(tumor necrosis factorrelated apoptosis.inducing ligand,TRAIL)기인가신속유도다충종류세포적조망.시일개안전유효적종류살상기인.본연구지재구건능재종류세포내특이성표체TRAIL기인적파향선상관병독,병탐토기체외항종류효응적가능궤제.방법:이용종류특이성계동자단립매역전록매(human telomerase reverse transcfiptase,hTERT)구건특이성살상종류세포적선상관병독재체pAAV-hTERT-TRAIL.통과여pAAV-Rc、pHelper공전염HEK293세포포장출병독AAV-hTERT-TRAIL.장해병독체외전염인결장암SW620세포、인간암HepG2세포、인폐암A549세포화정상세포NHLF、MRC5후,검측TRAIL기인적종류특이성표체.MTT법검측기대세포증식적영향,ELISA、Western blot법이급류식세포의검측세포적조망,병분석기체외항종류효응적가능궤제.결과:성공포장출병독AAVhTERT-TRAIL.RT-PCR、Western blot화면역조화법균증실AAV-hTERT-TRAIL능개도TRAIL기인재종류세포내특이성표체,단재정상세포내불표체.이100 MOI AAV-IlTERTTRAIL감염세포96 h후,SW620、A549화HepG2세포적증식솔분별시41.55%、44.29%、49.95%,NHLF화MRC5세포적증식솔분별시84.59%화87.22%.Western blot검측발현AAV-hTERT-TRAIL가격활Caspase통로.류식세포의화ELISA방법검측증실AAV-hTERT-TRAIL가유도세포조망.결론:hTERT적존재증강료선상관병독소휴대TRAIL기인표체적종류파향성화대정상세포적안전성.유타조공적살상기인가개도종류세포특이성적세포독효응.