CAJ | 학술논문

[目的]研究重组表达的硫矿硫化叶菌P2分子伴侣β亚基体外同源聚合体的结构和生化功能.[方法]利用PCR技术从硫矿硫化叶菌P2的基因组DNA中克隆得到分子伴侣β亚基的基因,将该基因克隆到表达载体pET-21a(+)上并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了表达.对纯化后的β亚基单体进行体外聚合,利用透射电镜观察β分子伴侣的结构,并对其促蛋白折叠性质进行了研究.[结果]硫矿硫化叶菌P2分子伴侣β亚基基因在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,纯化后的分子伴侣β亚基单体在ATP和Mg2+存在的条件下可自组装形成分子伴侣聚合体.透射电镜观察表明:该β分子伴侣具有Ⅱ型分子伴侣典型的双层面包圈结构,每个环由8个亚基构成.该β分子伴侣具有ATPase活性,最适反应温度为80℃;它不仅能够促进变性的绿色荧光蛋白(GFP)重新折叠,而且还能有效的提高木聚糖酶的热稳定性.[结论]本文根据P2基因组序列分析预测的分子伴侣基因设计引物,克隆表达了硫矿硫化叶菌P2分子伴侣的β亚基,纯化后对其进行体外聚合,透射电镜观察表明该聚合体具有Ⅱ型分子伴侣的经典结构,功能分析表明该β分子伴侣能够在体外促进异源蛋白质的折叠、提高其它酶分子的热稳定性.这为进一步深入研究嗜热古菌耐热抗逆的分子机制,奠定了良好的基础.
[목적]연구중조표체적류광류화협균P2분자반려β아기체외동원취합체적결구화생화공능.[방법]이용PCR기술종류광류화협균P2적기인조DNA중극륭득도분자반려β아기적기인,장해기인극륭도표체재체pET-21a(+)상병재대장간균BL21(DE3)중실현료표체.대순화후적β아기단체진행체외취합,이용투사전경관찰β분자반려적결구,병대기촉단백절첩성질진행료연구.[결과]류광류화협균P2분자반려β아기기인재대장간균BL21중실현료고효표체,순화후적분자반려β아기단체재ATP화Mg2+존재적조건하가자조장형성분자반려취합체.투사전경관찰표명:해β분자반려구유Ⅱ형분자반려전형적쌍층면포권결구,매개배유8개아기구성.해β분자반려구유ATPase활성,최괄반응온도위80℃;타불부능구촉진변성적록색형광단백(GFP)중신절첩,이차환능유효적제고목취당매적열은정성.[결론]본문근거P2기인조서렬분석예측적분자반려기인설계인물,극륭표체료류광류화협균P2분자반려적β아기,순화후대기진행체외취합,투사전경관찰표명해취합체구유Ⅱ형분자반려적경전결구,공능분석표명해β분자반려능구재체외촉진이원단백질적절첩、제고기타매분자적열은정성.저위진일보심입연구기열고균내열항역적분자궤제,전정료량호적기출.