江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2010年
3期
244-247
,共4页
病毒白细胞介素6基因%原核表达%融合蛋白%卡波济肉瘤相关疱疹病毒
病毒白細胞介素6基因%原覈錶達%融閤蛋白%卡波濟肉瘤相關皰疹病毒
병독백세포개소6기인%원핵표체%융합단백%잡파제육류상관포진병독
目的:在大肠埃希菌中表达卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)vIL-6基因,并进一步纯化和鉴定表达蛋白.方法:以本实验室已构建的重组质粒pGEX-6p-1-vIL-6为模板,PCR扩增目的基因片段,将PCR产物克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建vIL-6的重组原核表达质粒pET-32a(+)-vIL-6.将重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.表达产物通过镍亲和层析柱纯化并经蛋白质印迹法鉴定.结果:限制性内切酶检测和基因测序证实,成功构建了含有vIL-6基因的原核表达载体.蛋白质印迹法结果显示,在大肠埃希菌BL21(DE3)中His-Tag融合蛋白得到了表达,亲和层析法纯化后获得了相对分子质量为43 000的vIL-6融合蛋白.结论:重组质粒pET-32a(+) -vIL-6能在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,利用镍亲和层析柱可纯化获得融合蛋白.
目的:在大腸埃希菌中錶達卡波濟肉瘤相關皰疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)vIL-6基因,併進一步純化和鑒定錶達蛋白.方法:以本實驗室已構建的重組質粒pGEX-6p-1-vIL-6為模闆,PCR擴增目的基因片段,將PCR產物剋隆至原覈錶達載體pET-32a(+)中,構建vIL-6的重組原覈錶達質粒pET-32a(+)-vIL-6.將重組質粒轉化大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受態細胞,用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達融閤蛋白.錶達產物通過鎳親和層析柱純化併經蛋白質印跡法鑒定.結果:限製性內切酶檢測和基因測序證實,成功構建瞭含有vIL-6基因的原覈錶達載體.蛋白質印跡法結果顯示,在大腸埃希菌BL21(DE3)中His-Tag融閤蛋白得到瞭錶達,親和層析法純化後穫得瞭相對分子質量為43 000的vIL-6融閤蛋白.結論:重組質粒pET-32a(+) -vIL-6能在大腸埃希菌BL21(DE3)中錶達,利用鎳親和層析柱可純化穫得融閤蛋白.
목적:재대장애희균중표체잡파제육류상관포진병독(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)vIL-6기인,병진일보순화화감정표체단백.방법:이본실험실이구건적중조질립pGEX-6p-1-vIL-6위모판,PCR확증목적기인편단,장PCR산물극륭지원핵표체재체pET-32a(+)중,구건vIL-6적중조원핵표체질립pET-32a(+)-vIL-6.장중조질립전화대장애희균(E.coli)BL21(DE3)감수태세포,용이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도표체융합단백.표체산물통과얼친화층석주순화병경단백질인적법감정.결과:한제성내절매검측화기인측서증실,성공구건료함유vIL-6기인적원핵표체재체.단백질인적법결과현시,재대장애희균BL21(DE3)중His-Tag융합단백득도료표체,친화층석법순화후획득료상대분자질량위43 000적vIL-6융합단백.결론:중조질립pET-32a(+) -vIL-6능재대장애희균BL21(DE3)중표체,이용얼친화층석주가순화획득융합단백.
