生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
6期
790-793
,共4页
陈立瑾%田利源%李秀丽%陈树林%汪莉%王玉民
陳立瑾%田利源%李秀麗%陳樹林%汪莉%王玉民
진립근%전리원%리수려%진수림%왕리%왕옥민
β-防御素%Defb48%原核表达%亲和纯化
β-防禦素%Defb48%原覈錶達%親和純化
β-방어소%Defb48%원핵표체%친화순화
目的:获取小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因并原核表达、纯化,为研究其功能奠定基础.方法:提取小鼠附睾组织的总RNA,用RT-PCR技术扩增出不含信号肽的Defb48编码序列,将2段Defb48编码序列串联克隆至原核表达载体pET28(a)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白;用镍柱进行重组蛋白的纯化,然后进行SDS-PAGE和Western印迹分析鉴定.结果:获得实验所需小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因序列,测序结果与已发表的基因序列一致;在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达了His-Defb48融合蛋白,经Western印迹分析,在相对分子质量18 000处有特异的蛋白条带,镍柱纯化后获得纯度较好的融合蛋白.结论:克隆了小鼠附睾分泌的防御素Defb48基因,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达纯化出融合蛋白,为制备其多克隆抗体,进而进一步研究Defb48的功能奠定了基础.
目的:穫取小鼠附睪分泌的防禦素Defb48的基因併原覈錶達、純化,為研究其功能奠定基礎.方法:提取小鼠附睪組織的總RNA,用RT-PCR技術擴增齣不含信號肽的Defb48編碼序列,將2段Defb48編碼序列串聯剋隆至原覈錶達載體pET28(a)中,經酶切和測序鑒定正確的重組質粒轉化大腸桿菌Rosetta(DE3),IPTG誘導錶達重組蛋白;用鎳柱進行重組蛋白的純化,然後進行SDS-PAGE和Western印跡分析鑒定.結果:穫得實驗所需小鼠附睪分泌的防禦素Defb48的基因序列,測序結果與已髮錶的基因序列一緻;在大腸桿菌Rosetta(DE3)中錶達瞭His-Defb48融閤蛋白,經Western印跡分析,在相對分子質量18 000處有特異的蛋白條帶,鎳柱純化後穫得純度較好的融閤蛋白.結論:剋隆瞭小鼠附睪分泌的防禦素Defb48基因,併在大腸桿菌Rosetta(DE3)中錶達純化齣融閤蛋白,為製備其多剋隆抗體,進而進一步研究Defb48的功能奠定瞭基礎.
목적:획취소서부고분비적방어소Defb48적기인병원핵표체、순화,위연구기공능전정기출.방법:제취소서부고조직적총RNA,용RT-PCR기술확증출불함신호태적Defb48편마서렬,장2단Defb48편마서렬천련극륭지원핵표체재체pET28(a)중,경매절화측서감정정학적중조질립전화대장간균Rosetta(DE3),IPTG유도표체중조단백;용얼주진행중조단백적순화,연후진행SDS-PAGE화Western인적분석감정.결과:획득실험소수소서부고분비적방어소Defb48적기인서렬,측서결과여이발표적기인서렬일치;재대장간균Rosetta(DE3)중표체료His-Defb48융합단백,경Western인적분석,재상대분자질량18 000처유특이적단백조대,얼주순화후획득순도교호적융합단백.결론:극륭료소서부고분비적방어소Defb48기인,병재대장간균Rosetta(DE3)중표체순화출융합단백,위제비기다극륭항체,진이진일보연구Defb48적공능전정료기출.
