湖北医药学院学报
湖北醫藥學院學報
호북의약학원학보
JOURNAL OF HUBAI UNIVERSITY OF MEDICINE
2011年
5期
475-479
,共5页
孟忠吉%吴珺%张永红%汤守兵%李东%柯昌征%陈悦
孟忠吉%吳珺%張永紅%湯守兵%李東%柯昌徵%陳悅
맹충길%오군%장영홍%탕수병%리동%가창정%진열
土拨鼠肝炎病毒%土拨鼠肝炎病毒X蛋白%RNA干扰%小干扰RNA
土撥鼠肝炎病毒%土撥鼠肝炎病毒X蛋白%RNA榦擾%小榦擾RNA
토발서간염병독%토발서간염병독X단백%RNA간우%소간우RNA
目的:研究土拨鼠肝炎病毒(WHY)序列特异性siRNA对WHVX基因表达的抑制作用.方法:以WHV全长质粒为模板PCR扩增WHVX基因,克隆到pXF3H载体构建WHX-HA融合蛋白真核表达质粒(pXF3HWHx)；合成siRNA的模板序列,克隆到siRNA表达质粒psiRNA构建shRNA表达质粒(psiWx1、psiWx2)；质粒pXF3 H-WHx与psiWx1、psiWx2共转染Hela细胞,Western blot检测WHV X蛋白的表达.结果:Hela细胞中WHVX蛋白的表达受siRNA的抑制,psiWx1表达的siRNA抑制90％以上的X蛋白表达,并呈剂量依赖性,但是WHV X基因靶位点中2个突变的核苷酸可使这种干扰作用消失.结论:质粒表达的siRNA序列特异性抑制WHV X蛋白的表达.
目的:研究土撥鼠肝炎病毒(WHY)序列特異性siRNA對WHVX基因錶達的抑製作用.方法:以WHV全長質粒為模闆PCR擴增WHVX基因,剋隆到pXF3H載體構建WHX-HA融閤蛋白真覈錶達質粒(pXF3HWHx)；閤成siRNA的模闆序列,剋隆到siRNA錶達質粒psiRNA構建shRNA錶達質粒(psiWx1、psiWx2)；質粒pXF3 H-WHx與psiWx1、psiWx2共轉染Hela細胞,Western blot檢測WHV X蛋白的錶達.結果:Hela細胞中WHVX蛋白的錶達受siRNA的抑製,psiWx1錶達的siRNA抑製90％以上的X蛋白錶達,併呈劑量依賴性,但是WHV X基因靶位點中2箇突變的覈苷痠可使這種榦擾作用消失.結論:質粒錶達的siRNA序列特異性抑製WHV X蛋白的錶達.
목적:연구토발서간염병독(WHY)서렬특이성siRNA대WHVX기인표체적억제작용.방법:이WHV전장질립위모판PCR확증WHVX기인,극륭도pXF3H재체구건WHX-HA융합단백진핵표체질립(pXF3HWHx)；합성siRNA적모판서렬,극륭도siRNA표체질립psiRNA구건shRNA표체질립(psiWx1、psiWx2)；질립pXF3 H-WHx여psiWx1、psiWx2공전염Hela세포,Western blot검측WHV X단백적표체.결과:Hela세포중WHVX단백적표체수siRNA적억제,psiWx1표체적siRNA억제90％이상적X단백표체,병정제량의뢰성,단시WHV X기인파위점중2개돌변적핵감산가사저충간우작용소실.결론:질립표체적siRNA서렬특이성억제WHV X단백적표체.
