世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2008年
14期
1507-1512
,共6页
周平%房殿春%陈兵%毛高平%刘为纹%曹传平%步晓华%张启杰
週平%房殿春%陳兵%毛高平%劉為紋%曹傳平%步曉華%張啟傑
주평%방전춘%진병%모고평%류위문%조전평%보효화%장계걸
端粒%端粒酶%端粒相关蛋白%酵母双杂交技术%肿瘤
耑粒%耑粒酶%耑粒相關蛋白%酵母雙雜交技術%腫瘤
단립%단립매%단립상관단백%효모쌍잡교기술%종류
目的:进一步了解端粒酶的生物学功能及其在永生化或肿瘤细胞中作用的分子机制,筛选新的端粒相关蛋白分子.方法:基于酵母双杂交技术原理,采用DNA重组技术构建诱饵融合蛋白表达载体,筛选cDNA文库,β-半乳糖苷酶滤膜影印分析确证阳性克隆,对阳性克隆质粒测序并在GenBank进行cDNA序列同源性比较.结果: AH109、Y187酵母菌基因表型稳定,无His渗漏表达.成功构建端粒酶催化亚单位诱饵融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT,其表达的融合蛋白对AH109酵母细胞生长无毒性且不具有激活自身报告基因(LacZ)的作用.从cDNA文库中筛选到Ade+、Leu+、Trp+和His+阳性克隆28个,β-半乳糖苷酶菌落影印滤膜分析筛选到Ade+、His+和LacZ+阳性克隆12个,其中有5个文库质粒具有自身激活报告基因的作用,予以弃除.7个阳性克隆质粒测序发现有2个为重复序列,cDNA序列同源性比较最终获得6个已收录人cDNA序列,他们分别为T-STAR、PAWR、I-1、SMARCB1、LOXL3和HKR3.结论:获取新的端粒相关蛋白可了解端粒酶全酶的结构及其在肿瘤、细胞永生化的生物学功能及分子机制,为肿瘤、衰老的发生及防治奠定重要的理论基础.
目的:進一步瞭解耑粒酶的生物學功能及其在永生化或腫瘤細胞中作用的分子機製,篩選新的耑粒相關蛋白分子.方法:基于酵母雙雜交技術原理,採用DNA重組技術構建誘餌融閤蛋白錶達載體,篩選cDNA文庫,β-半乳糖苷酶濾膜影印分析確證暘性剋隆,對暘性剋隆質粒測序併在GenBank進行cDNA序列同源性比較.結果: AH109、Y187酵母菌基因錶型穩定,無His滲漏錶達.成功構建耑粒酶催化亞單位誘餌融閤蛋白錶達載體pGBKT7-hTERT,其錶達的融閤蛋白對AH109酵母細胞生長無毒性且不具有激活自身報告基因(LacZ)的作用.從cDNA文庫中篩選到Ade+、Leu+、Trp+和His+暘性剋隆28箇,β-半乳糖苷酶菌落影印濾膜分析篩選到Ade+、His+和LacZ+暘性剋隆12箇,其中有5箇文庫質粒具有自身激活報告基因的作用,予以棄除.7箇暘性剋隆質粒測序髮現有2箇為重複序列,cDNA序列同源性比較最終穫得6箇已收錄人cDNA序列,他們分彆為T-STAR、PAWR、I-1、SMARCB1、LOXL3和HKR3.結論:穫取新的耑粒相關蛋白可瞭解耑粒酶全酶的結構及其在腫瘤、細胞永生化的生物學功能及分子機製,為腫瘤、衰老的髮生及防治奠定重要的理論基礎.
목적:진일보료해단립매적생물학공능급기재영생화혹종류세포중작용적분자궤제,사선신적단립상관단백분자.방법:기우효모쌍잡교기술원리,채용DNA중조기술구건유이융합단백표체재체,사선cDNA문고,β-반유당감매려막영인분석학증양성극륭,대양성극륭질립측서병재GenBank진행cDNA서렬동원성비교.결과: AH109、Y187효모균기인표형은정,무His삼루표체.성공구건단립매최화아단위유이융합단백표체재체pGBKT7-hTERT,기표체적융합단백대AH109효모세포생장무독성차불구유격활자신보고기인(LacZ)적작용.종cDNA문고중사선도Ade+、Leu+、Trp+화His+양성극륭28개,β-반유당감매균락영인려막분석사선도Ade+、His+화LacZ+양성극륭12개,기중유5개문고질립구유자신격활보고기인적작용,여이기제.7개양성극륭질립측서발현유2개위중복서렬,cDNA서렬동원성비교최종획득6개이수록인cDNA서렬,타문분별위T-STAR、PAWR、I-1、SMARCB1、LOXL3화HKR3.결론:획취신적단립상관단백가료해단립매전매적결구급기재종류、세포영생화적생물학공능급분자궤제,위종류、쇠로적발생급방치전정중요적이론기출.
