CAJ | 학술논문

目的:目前对于是否存在外周血来源间充质干细胞备受争议.实验拟进一步探讨在皮肤损伤与非损伤条件下,外周血来源间充质干细胞的分离培养及其成骨、成脂多向分化特性.方法:实验于1996-08/1997-11在解放军第四军医大学组织工程研发中心完成.①动物:清洁级SD大鼠24只,随机数字表法分为正常组、创面组,12只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:创面组大鼠麻醉后,背部切去3 cm×3 cm全层皮肤,建立创伤模型.术后5 d,两组大鼠腹主动脉抽血, 8 mL/只,加入含体积分数为0.1胎牛血清的α-MEM培养基,密度梯度法分离培养外周血来源间充质干细胞.取大鼠双侧股骨、胫骨,全骨髓法分离培养骨髓来源间充质干细胞作为对照.③实验评估:培养至第12天,计数原代培养每1×105个外周血单个核细胞所形成的间充质干细胞克隆数.取第3代外周血间充质干细胞,行CD45、CD34、I型胶原免疫组织化学鉴定细胞表型;按1×104密度接种于12孔板,细胞贴壁后分别换用成骨、成脂诱导液培养,以茜素红、油红染色检测其分化特性.结果:①细胞形态观察:原代培养的外周血来源间充质干细胞呈成纤维样.②克隆形成:外周血来源间充质干细胞形成的克隆数仅为骨髓来源间充质干细胞的1/6～1/8,创面组外周血间充质干细胞形成的克隆数是正常组3～4倍.③细胞表型鉴定:外周血来源间充干细胞CD45、CD34呈阴性,I型胶原呈阳性.④成骨及成脂诱导:外周血间充质干细胞成骨诱导后21 d出现钙沉积,茜素红染色呈阳性;成脂诱导后14 d有少量脂滴出现,油红染色为阳性.结论:①皮肤损伤状态下外周血间充质干细胞克隆数量是正常条件的3～4倍,但仍远低于骨髓来源间充质干细胞的克隆能力.②体外分离培养的外周血间充质干细胞具备成骨、成脂分化特性.
목적:목전대우시부존재외주혈래원간충질간세포비수쟁의.실험의진일보탐토재피부손상여비손상조건하,외주혈래원간충질간세포적분리배양급기성골、성지다향분화특성.방법:실험우1996-08/1997-11재해방군제사군의대학조직공정연발중심완성.①동물:청길급SD대서24지,수궤수자표법분위정상조、창면조,12지/조,실험과정중대동물적처치부합동물윤리학표준.②실험방법:창면조대서마취후,배부절거3 cm×3 cm전층피부,건립창상모형.술후5 d,량조대서복주동맥추혈, 8 mL/지,가입함체적분수위0.1태우혈청적α-MEM배양기,밀도제도법분리배양외주혈래원간충질간세포.취대서쌍측고골、경골,전골수법분리배양골수래원간충질간세포작위대조.③실험평고:배양지제12천,계수원대배양매1×105개외주혈단개핵세포소형성적간충질간세포극륭수.취제3대외주혈간충질간세포,행CD45、CD34、I형효원면역조직화학감정세포표형;안1×104밀도접충우12공판,세포첩벽후분별환용성골、성지유도액배양,이천소홍、유홍염색검측기분화특성.결과:①세포형태관찰:원대배양적외주혈래원간충질간세포정성섬유양.②극륭형성:외주혈래원간충질간세포형성적극륭수부위골수래원간충질간세포적1/6～1/8,창면조외주혈간충질간세포형성적극륭수시정상조3～4배.③세포표형감정:외주혈래원간충간세포CD45、CD34정음성,I형효원정양성.④성골급성지유도:외주혈간충질간세포성골유도후21 d출현개침적,천소홍염색정양성;성지유도후14 d유소량지적출현,유홍염색위양성.결론:①피부손상상태하외주혈간충질간세포극륭수량시정상조건적3～4배,단잉원저우골수래원간충질간세포적극륭능력.②체외분리배양적외주혈간충질간세포구비성골、성지분화특성.