CAJ | 학술논문

目的:用RNA干扰技术下调乳鼠心肌细胞钙调蛋白激酶Ⅱδ(CAMKⅡδ)的表达,观察CAMKⅡδ对心肌细胞肥厚及细胞内钙浓度的影响.方法:构建针对CAMKⅡδ基因的特异性短发夹RNA(shRNA)编码序列的质粒载体pCAMKⅡδshRNA-1,pCAMKδshRNA-2,以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体pGenesil-HK(pHK)为对照,转染原代培养的乳鼠心肌细胞,通过半定量RT-PCR和Western blot法检测CAMKⅡδ表达情况,以内参照GAPDH进行标化.用钙荧光指示剂Fura-2/AM结合图像分析各组心肌细胞内钙离子浓度.用3>H-LEU掺入量来检验各组心肌细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下促心肌细胞肥大效应的影响.结果:①pCAMKⅡδshRNA-1使CAMKⅡδ的mRNA和蛋白质表达较对照组分别降低62%和50%,pCAMKⅡδshRNA-2使之分别降低40%和35%,差异有统计学意义.pHK与空白对照组CAMKⅡδ表达差异无统计学意义.②给予AngⅡ(10-7mol/L)刺激48 h后,pCAMKⅡδshRNA-1,pCAMKⅡδshRNA-2组的3H-LEU掺入量和细胞内钙浓度显著低于空白对照组和对照质粒(P<0.01).结论:RNA干扰技术能选择性下调原代培养的乳鼠心肌细胞CAMKⅡδ的表达,并显著抑制AngⅡ的促细胞肥大和促细胞内钙超载的效应.
목적:용RNA간우기술하조유서심기세포개조단백격매Ⅱδ(CAMKⅡδ)적표체,관찰CAMKⅡδ대심기세포비후급세포내개농도적영향.방법:구건침대CAMKⅡδ기인적특이성단발협RNA(shRNA)편마서렬적질립재체pCAMKⅡδshRNA-1,pCAMKδshRNA-2,이함비특이성shRNA편마서렬적질립재체pGenesil-HK(pHK)위대조,전염원대배양적유서심기세포,통과반정량RT-PCR화Western blot법검측CAMKⅡδ표체정황,이내삼조GAPDH진행표화.용개형광지시제Fura-2/AM결합도상분석각조심기세포내개리자농도.용3>H-LEU참입량래검험각조심기세포재혈관긴장소Ⅱ(AngⅡ)자격하촉심기세포비대효응적영향.결과:①pCAMKⅡδshRNA-1사CAMKⅡδ적mRNA화단백질표체교대조조분별강저62%화50%,pCAMKⅡδshRNA-2사지분별강저40%화35%,차이유통계학의의.pHK여공백대조조CAMKⅡδ표체차이무통계학의의.②급여AngⅡ(10-7mol/L)자격48 h후,pCAMKⅡδshRNA-1,pCAMKⅡδshRNA-2조적3H-LEU참입량화세포내개농도현저저우공백대조조화대조질립(P<0.01).결론:RNA간우기술능선택성하조원대배양적유서심기세포CAMKⅡδ적표체,병현저억제AngⅡ적촉세포비대화촉세포내개초재적효응.