实用临床医药杂志
實用臨床醫藥雜誌
실용림상의약잡지
JOURNAL OF JIANGSU CLINICAL MEDICINE
2008年
5期
24-27,41
,共5页
傅奕%裴冬生%陆梁%胡书群%赵惠仁
傅奕%裴鼕生%陸樑%鬍書群%趙惠仁
부혁%배동생%륙량%호서군%조혜인
白细胞介素18%定点突变%干扰素-γ%核因子-κB
白細胞介素18%定點突變%榦擾素-γ%覈因子-κB
백세포개소18%정점돌변%간우소-γ%핵인자-κB
目的 研究IL-18结构与功能的关系.方法 用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R.将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α.经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在.菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性.然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性.结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92 %以上.突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%.结论 在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用.
目的 研究IL-18結構與功能的關繫.方法 用重疊延伸PCR定點突變技術構建人白介素18(hIL-18)突變體hIL-18D134R.將突變體cDNA與原覈錶達載體pJW2重組併轉化大腸桿菌DH5α.經熱誘導錶達蛋白質,SDS-PAGE證實,錶達的目的蛋白質以包涵體形式存在.菌體經超聲破碎後,包涵體以2 mol/L尿素洗滌,8 mol/L尿素溶解,併經Sephadex G-75柱純化及稀釋、透析複性.然後以誘導人外週血單箇覈細胞(PBMC)產生榦擾素-γ(IFN-γ)及對覈因子-κB(NF-κB)的激活能力為指標,檢測突變體的生物學活性.結果構建的突變體hIL-18D134R可在大腸桿菌DH5α中高效錶達,經包涵體洗滌和Sephadex G-75柱純化後,純度達92 %以上.突變體D134R對IFN-γ的誘生能力及對NF-κB的激活能力分彆為野生型hIL-18的19%和23%.結論 在人IL-18的氨基痠序列中,Asp134對其生物學功能有非常重要的作用.
목적 연구IL-18결구여공능적관계.방법 용중첩연신PCR정점돌변기술구건인백개소18(hIL-18)돌변체hIL-18D134R.장돌변체cDNA여원핵표체재체pJW2중조병전화대장간균DH5α.경열유도표체단백질,SDS-PAGE증실,표체적목적단백질이포함체형식존재.균체경초성파쇄후,포함체이2 mol/L뇨소세조,8 mol/L뇨소용해,병경Sephadex G-75주순화급희석、투석복성.연후이유도인외주혈단개핵세포(PBMC)산생간우소-γ(IFN-γ)급대핵인자-κB(NF-κB)적격활능력위지표,검측돌변체적생물학활성.결과구건적돌변체hIL-18D134R가재대장간균DH5α중고효표체,경포함체세조화Sephadex G-75주순화후,순도체92 %이상.돌변체D134R대IFN-γ적유생능력급대NF-κB적격활능력분별위야생형hIL-18적19%화23%.결론 재인IL-18적안기산서렬중,Asp134대기생물학공능유비상중요적작용.
