Asia-I口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验
Asia-I구제역병독P1-2A기인진핵표체질립적구건급소서면역시험
Construct of the Plasmids of Asia-I FMDV P1-2A Genes Expressing in Eukaryotic and Immunnity Test
  • 万方数据
    中国生物工程杂志 중국생물공정잡지
    JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
    2008年 8期 31-35 ,共5页

    牟伟锋%金宁一%鲁承%霍晓伟%胡博%屈勇刚%常巧呈%于长勇%颜雯%丛艳昭%曹世诺

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    FMDV%Asia%Ⅰ%P1-2A基因%真核表达%免疫应答 FMDV%Asia%Ⅰ%P1-2A基因%真覈錶達%免疫應答
    FMDV%Asia%Ⅰ%P1-2A기인%진핵표체%면역응답
    目的:构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A 基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠,评价其体液免疫和细胞免疫水平.方法:通过RT-PCR 方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上.将pMD18-T-P1-2A和 pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A.将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测.再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验.结果:酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05).间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05).结论:成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答.
    목적:구건함유Asia-Ⅰ형구제역병독(FMDV)의각단백전체P1-2A 기인적진핵표체질립pVAXⅠ-P1-2A,병용pVAXⅠ-P1-2A면역소서,평개기체액면역화세포면역수평.방법:통과RT-PCR 방법확증득도함유FMDV P1-2A편마구적목적기인,병장기극륭도pMD18-T재체상.장pMD18-T-P1-2A화 pVAXⅠ분별경EcoRⅤ화XbaⅠ쌍매절후련접구건진핵표체질립pVAXⅠ-P1-2A.장매절감정정학후적중조질립전염HeLa세포진행IFA검측.재진행소서혈청특이성항체시험、소서T림파세포증식시험화IFN-γ ELISPOT시험.결과:매절결과여예기목적조대대소상부;형광결과표명경pVAXⅠ-P1-2A전염적세포유명현적황록색형광,설명P1-2A기인재HeLa세포중득도료표체;소서면역결과표명,면역적소서도산생료교강적체액면역화세포면역,병차T림파세포증식수화산생IFN-γ적세포수화대조조상비현저제고(P<0.05).간접ELISA시험표명,재면역제14천항체수평비대조조명현증고(P<0.05).결론:성공구건료진핵표체질립pVAXⅠ-P1-2A,병통과소서면역시험발현중조질립시험조능구유도산생특이성적체액면역화세포면역응답.
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