CAJ | 학술논문

目的:探讨重组腺病毒转导的骨髓间充质细胞导向(MSC)的睫状神经营养因子(CNTF)基因靶向性治疗多发性硬化对髓鞘和轴突的保护机制.方法:先构建、扩增、纯化Ad-CNTF-IBES-GFP,在体外培养MSC细胞.将1×108Ad-CNTF-IRES-GFP转染MSCS1×106,测定上清液中CNTF的浓度.再用MOG 35-55建立C57BL/6小鼠EAE模型,将Ad-CNTF-IRES-GFP转染的MSC移植治疗EAE小鼠,观察其病情评分;免疫荧光观察其病变部位的外源性MSO数量;免疫组化观察少突胶质细胞前体细胞(OPC)-NG2(+)细胞在病变部位的数量,Western blot和免疫组化法观察神经生长因子CNTF表达,免疫组化观察促凋亡蛋白Caspase-3表达;病理观察髓鞘、轴突损伤情况;电镜观察髓鞘和轴突以及ODC损伤情况;所有的数据用(x)±s表示.采用SPSS 13.0进行统计分析.结果用多因素方差分析,P＜0.05差异有显著性.结果:MSC-Ad-CNTF-IRES-GFP治疗的EAE小鼠病情显著减轻.不仅平均发病时间缩短,发病率下降,病情减轻,而且病情严重程度也明显减轻.外源性MSC出现在EAE的脊髓病变部位.治疗后的EAE小鼠脊髓病变部位的NG2(+)表达明显增加,促凋亡蛋白Caspaae-3的表达明显降低.治疗后的EAE小鼠病变部位的髓鞘和轴突变性明显减轻.结论:MSC-AD-CNTF-GFP可有效治疗EAE动物.其机制可能是:Ad-CNTF-IRES-GFP转染的MsC细胞定向去病变部位,升高其部位CNTF水平和NG2(+)细胞数量,减轻其部位髓鞘、轴突及ODC损伤,减少促凋亡蛋白Caspase-3表达.
목적:탐토중조선병독전도적골수간충질세포도향(MSC)적첩상신경영양인자(CNTF)기인파향성치료다발성경화대수초화축돌적보호궤제.방법:선구건、확증、순화Ad-CNTF-IBES-GFP,재체외배양MSC세포.장1×108Ad-CNTF-IRES-GFP전염MSCS1×106,측정상청액중CNTF적농도.재용MOG 35-55건립C57BL/6소서EAE모형,장Ad-CNTF-IRES-GFP전염적MSC이식치료EAE소서,관찰기병정평분;면역형광관찰기병변부위적외원성MSO수량;면역조화관찰소돌효질세포전체세포(OPC)-NG2(+)세포재병변부위적수량,Western blot화면역조화법관찰신경생장인자CNTF표체,면역조화관찰촉조망단백Caspase-3표체;병리관찰수초、축돌손상정황;전경관찰수초화축돌이급ODC손상정황;소유적수거용(x)±s표시.채용SPSS 13.0진행통계분석.결과용다인소방차분석,P＜0.05차이유현저성.결과:MSC-Ad-CNTF-IRES-GFP치료적EAE소서병정현저감경.불부평균발병시간축단,발병솔하강,병정감경,이차병정엄중정도야명현감경.외원성MSC출현재EAE적척수병변부위.치료후적EAE소서척수병변부위적NG2(+)표체명현증가,촉조망단백Caspaae-3적표체명현강저.치료후적EAE소서병변부위적수초화축돌변성명현감경.결론:MSC-AD-CNTF-GFP가유효치료EAE동물.기궤제가능시:Ad-CNTF-IRES-GFP전염적MsC세포정향거병변부위,승고기부위CNTF수평화NG2(+)세포수량,감경기부위수초、축돌급ODC손상,감소촉조망단백Caspase-3표체.