江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2010年
3期
239-243
,共5页
田树伟%邵世和%韩军%黄河%黄世腾
田樹偉%邵世和%韓軍%黃河%黃世騰
전수위%소세화%한군%황하%황세등
幽门螺杆菌%Ⅳ型分泌系统%cagM基因%抗体
幽門螺桿菌%Ⅳ型分泌繫統%cagM基因%抗體
유문라간균%Ⅳ형분비계통%cagM기인%항체
目的:构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体,分析其抗原性并制备抗体.方法:应用PCR技术从H.pylori基因组扩增 cagM基因片段,TA克隆后测序分析,并构建表达载体pET-28a(+)-cagM,转化 E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及鉴定表达蛋白,表达蛋白以 Ni2+-NTA 柱进行纯化,用软件分析其抗原性后,免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测多克隆抗体效价.结果:测序结果表明cagM基因全长1 131 bp(基因库登录号为GU269568),编码376个氨基酸,与基因库中已知菌株J99,26695和G27的氨基酸同源性为98%～99%;诱导表达后经SDS-PAGE检测表明,在43 700处发现一条新生条带,Ni2+-NTA柱纯化后为单一条带,软件分析表明其抗原性较强,免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶ 1.6×105.结论:首次成功克隆并表达了H.pylori pNCTC 11637 cagM基因,并制备了其抗体,为以后进一步研究其生物学功能以及H.pylori相关疾病的检测与治疗奠定了基础.
目的:構建錶達幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌繫統cagM(HP0537)全長編碼基因的原覈錶達載體,分析其抗原性併製備抗體.方法:應用PCR技術從H.pylori基因組擴增 cagM基因片段,TA剋隆後測序分析,併構建錶達載體pET-28a(+)-cagM,轉化 E.coli BL21,IPTG誘導錶達,SDS-PAGE及鑒定錶達蛋白,錶達蛋白以 Ni2+-NTA 柱進行純化,用軟件分析其抗原性後,免疫傢兔製備多剋隆抗體,ELISA檢測多剋隆抗體效價.結果:測序結果錶明cagM基因全長1 131 bp(基因庫登錄號為GU269568),編碼376箇氨基痠,與基因庫中已知菌株J99,26695和G27的氨基痠同源性為98%～99%;誘導錶達後經SDS-PAGE檢測錶明,在43 700處髮現一條新生條帶,Ni2+-NTA柱純化後為單一條帶,軟件分析錶明其抗原性較彊,免疫傢兔製備的多剋隆抗體效價為1∶ 1.6×105.結論:首次成功剋隆併錶達瞭H.pylori pNCTC 11637 cagM基因,併製備瞭其抗體,為以後進一步研究其生物學功能以及H.pylori相關疾病的檢測與治療奠定瞭基礎.
목적:구건표체유문라간균(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV형분비계통cagM(HP0537)전장편마기인적원핵표체재체,분석기항원성병제비항체.방법:응용PCR기술종H.pylori기인조확증 cagM기인편단,TA극륭후측서분석,병구건표체재체pET-28a(+)-cagM,전화 E.coli BL21,IPTG유도표체,SDS-PAGE급감정표체단백,표체단백이 Ni2+-NTA 주진행순화,용연건분석기항원성후,면역가토제비다극륭항체,ELISA검측다극륭항체효개.결과:측서결과표명cagM기인전장1 131 bp(기인고등록호위GU269568),편마376개안기산,여기인고중이지균주J99,26695화G27적안기산동원성위98%～99%;유도표체후경SDS-PAGE검측표명,재43 700처발현일조신생조대,Ni2+-NTA주순화후위단일조대,연건분석표명기항원성교강,면역가토제비적다극륭항체효개위1∶ 1.6×105.결론:수차성공극륭병표체료H.pylori pNCTC 11637 cagM기인,병제비료기항체,위이후진일보연구기생물학공능이급H.pylori상관질병적검측여치료전정료기출.
