CAJ | 학술논문

目的:探讨以自体富含血小板血浆(PRP)凝胶复合脂肪间充质干细胞(ADSCs)构建可注射组织工程髓核的可行性.方法:将体外扩增的第3代兔ADSCs经流式细胞仪鉴定后接种至自体PRP凝胶中,体外立体培养2周、4周、8周时分别行大体观察、组织学检查、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)免疫荧光法观察细胞在PRP凝胶中的分布及存活情况;分光光度法检测PRP凝胶-细胞复合体中糖胺聚搪(GAG)含量,实时荧光定量PCR法检测低氧诱导因子(HIF-la)、蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(CoUagenⅡ)基因表达情况.结果:流式细胞仪检测显示体外扩增的第3代细胞CD90阳性率为95.2%,CD45阳性率为O.9%.培养2、4、8周时PRP凝胶细胞复合体均为表面光滑的凝胶状,弹性较好;番红O染色2周时细胞外基质几乎不着色,4周时可见细胞周围呈粉色的弱阳性染色,8周时多数细胞周围呈红色阳性染色.HE染色和扫描电镜各时问点均可见细胞均匀分布于网络状支架内;BrdU免疫荧光法显示细胞在支架中生存状态良好,培养4周时阳性细胞数较培养2周时明显增多(P<O.05),8周时较4周时明显增多(p<0.05).培养4周时GAG含量较培养2周时明显增高(P<0.05),8周时较4周时明显增高(P<0.05);培养4周时与培养2周时比较3个目的基因mRNA表达量均增高,差异有显著性(P<0.05),8周时与4周时比较亦明显增高(P<0.05).结论:以兔自体PRP凝胶与ADSCs构建的复合体在体外培养时细胞可以向类髓核样细胞分化,用此方法构建可注射组织工程髓核具有可行性.
목적:탐토이자체부함혈소판혈장(PRP)응효복합지방간충질간세포(ADSCs)구건가주사조직공정수핵적가행성.방법:장체외확증적제3대토ADSCs경류식세포의감정후접충지자체PRP응효중,체외입체배양2주、4주、8주시분별행대체관찰、조직학검사、5-추-2-탈양뇨밀정(BrdU)면역형광법관찰세포재PRP응효중적분포급존활정황;분광광도법검측PRP응효-세포복합체중당알취당(GAG)함량,실시형광정량PCR법검측저양유도인자(HIF-la)、단백다당(Aggrecan)、Ⅱ형효원(CoUagenⅡ)기인표체정황.결과:류식세포의검측현시체외확증적제3대세포CD90양성솔위95.2%,CD45양성솔위O.9%.배양2、4、8주시PRP응효세포복합체균위표면광활적응효상,탄성교호;번홍O염색2주시세포외기질궤호불착색,4주시가견세포주위정분색적약양성염색,8주시다수세포주위정홍색양성염색.HE염색화소묘전경각시문점균가견세포균균분포우망락상지가내;BrdU면역형광법현시세포재지가중생존상태량호,배양4주시양성세포수교배양2주시명현증다(P<O.05),8주시교4주시명현증다(p<0.05).배양4주시GAG함량교배양2주시명현증고(P<0.05),8주시교4주시명현증고(P<0.05);배양4주시여배양2주시비교3개목적기인mRNA표체량균증고,차이유현저성(P<0.05),8주시여4주시비교역명현증고(P<0.05).결론:이토자체PRP응효여ADSCs구건적복합체재체외배양시세포가이향류수핵양세포분화,용차방법구건가주사조직공정수핵구유가행성.