CAJ | 학술논문

肌肉生长抑制素(MSTN)能够限制肌纤维的增粗增大,而突变的肌肉生长抑制素前肽(Pro-MSTN-D75A)能阻止MSTN与相应受体的结合,从而解除MSTN对肌纤维的抑制作用.猪是我国最重要的肉用家畜,通过操作MSTN提高其瘦肉产量,将对我国生猪生产具有特殊意义.本研究用通城猪妊娠3个月的胚胎为材料,提取背最长肌RNA并以此为模板,用反转录PCR扩增猪MSTN前肽cDNA序列(不含信号肽),并将其连接到原核表达载体pGEX-6p-1上.通过定点突变将编码天冬氨酸的密码子变为内氨酸密码子(D75A),构建了原核表达载体pGEX-ProM(SP-)和pGEX-ProM(SP-)D75A.重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21感受态细胞并经IPTG诱导表达,结果表明,转化pGEX-ProM(SP-)质粒的E.coli BL21工程菌用终浓度为0.6 mmol/L的IPTG诱导5h表达情况最好；而转化pGEX-ProM(SP-)D75A的工程菌在1 mmol/L的IPTG诱导6h的条件下表达情况最好.用GST-Trap蛋白纯化系统纯化回收总分子量大小约为51kD融合蛋白(GST蛋白标签分子量为26 kD,MSTN前肽蛋白分子量为25 kD).纯化蛋白的浓度ProM(-SP)为1.87 mg/mL,ProM(-SP)D75A为1.21 mg/mL.本研究建立了大肠杆菌表达猪MSTN前肽的最佳条件,提高了生产效率,并为研究MSTN前肽在动物体内的生物学功能以及制备单克隆抗体提供基础资料.
기육생장억제소(MSTN)능구한제기섬유적증조증대,이돌변적기육생장억제소전태(Pro-MSTN-D75A)능조지MSTN여상응수체적결합,종이해제MSTN대기섬유적억제작용.저시아국최중요적육용가축,통과조작MSTN제고기수육산량,장대아국생저생산구유특수의의.본연구용통성저임신3개월적배태위재료,제취배최장기RNA병이차위모판,용반전록PCR확증저MSTN전태cDNA서렬(불함신호태),병장기련접도원핵표체재체pGEX-6p-1상.통과정점돌변장편마천동안산적밀마자변위내안산밀마자(D75A),구건료원핵표체재체pGEX-ProM(SP-)화pGEX-ProM(SP-)D75A.중조질립전화대장간균(Escherichia coli)BL21감수태세포병경IPTG유도표체,결과표명,전화pGEX-ProM(SP-)질립적E.coli BL21공정균용종농도위0.6 mmol/L적IPTG유도5h표체정황최호；이전화pGEX-ProM(SP-)D75A적공정균재1 mmol/L적IPTG유도6h적조건하표체정황최호.용GST-Trap단백순화계통순화회수총분자량대소약위51kD융합단백(GST단백표첨분자량위26 kD,MSTN전태단백분자량위25 kD).순화단백적농도ProM(-SP)위1.87 mg/mL,ProM(-SP)D75A위1.21 mg/mL.본연구건립료대장간균표체저MSTN전태적최가조건,제고료생산효솔,병위연구MSTN전태재동물체내적생물학공능이급제비단극륭항체제공기출자료.