基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2012年
10期
1183-1187
,共5页
曹一鑫%冯新%王建力%陈莉
曹一鑫%馮新%王建力%陳莉
조일흠%풍신%왕건력%진리
发夹状小分子干扰RNA(shRNA)%VEGF%人皮肤鳞癌细胞(A431细胞)
髮夾狀小分子榦擾RNA(shRNA)%VEGF%人皮膚鱗癌細胞(A431細胞)
발협상소분자간우RNA(shRNA)%VEGF%인피부린암세포(A431세포)
目的 在皮肤鳞癌细胞(A431)中下调VEGF mRNA和VEGF蛋白的表达,观察其对A431细胞增殖、迁移和黏附的影响.方法 构建psVEGF-shRNA真核表达质粒(psilencer-VEGF1-shRNA,VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shR-NA,VEGF-s2)干预A431细胞,同时构建含随机靶序列的阴性对照表达质粒(psilencer-Target-off-shRNA,T-off).RT-QPCR,Western blot和ELISA检测细胞内VEGFmRNA和蛋白表达;CCK-8法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期百分比与细胞凋亡;划痕试验和Transwell小室试验检测细胞二维、三维空间的迁移能力;FN黏附试验检测细胞黏附潜能.结果 A431细胞转染psVEGF-shRNA后活性降低,细胞周期发生阻滞,与对照组相比细胞比率显著增加,在G1期明显降低,在S期伴细胞调亡增加.细胞内VEGFmRNA和VEGF蛋白表达下降,细胞迁移和黏附潜能力均受到抑制(P＜0.05).结论 VEGF是人皮肤鳞癌A431细胞生长相关的重要基因,干扰VEGF基因能有效抑制A431细胞的增殖、迁移和黏附.
目的 在皮膚鱗癌細胞(A431)中下調VEGF mRNA和VEGF蛋白的錶達,觀察其對A431細胞增殖、遷移和黏附的影響.方法 構建psVEGF-shRNA真覈錶達質粒(psilencer-VEGF1-shRNA,VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shR-NA,VEGF-s2)榦預A431細胞,同時構建含隨機靶序列的陰性對照錶達質粒(psilencer-Target-off-shRNA,T-off).RT-QPCR,Western blot和ELISA檢測細胞內VEGFmRNA和蛋白錶達;CCK-8法檢測細胞活性;流式細胞儀檢測細胞週期百分比與細胞凋亡;劃痕試驗和Transwell小室試驗檢測細胞二維、三維空間的遷移能力;FN黏附試驗檢測細胞黏附潛能.結果 A431細胞轉染psVEGF-shRNA後活性降低,細胞週期髮生阻滯,與對照組相比細胞比率顯著增加,在G1期明顯降低,在S期伴細胞調亡增加.細胞內VEGFmRNA和VEGF蛋白錶達下降,細胞遷移和黏附潛能力均受到抑製(P＜0.05).結論 VEGF是人皮膚鱗癌A431細胞生長相關的重要基因,榦擾VEGF基因能有效抑製A431細胞的增殖、遷移和黏附.
목적 재피부린암세포(A431)중하조VEGF mRNA화VEGF단백적표체,관찰기대A431세포증식、천이화점부적영향.방법 구건psVEGF-shRNA진핵표체질립(psilencer-VEGF1-shRNA,VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shR-NA,VEGF-s2)간예A431세포,동시구건함수궤파서렬적음성대조표체질립(psilencer-Target-off-shRNA,T-off).RT-QPCR,Western blot화ELISA검측세포내VEGFmRNA화단백표체;CCK-8법검측세포활성;류식세포의검측세포주기백분비여세포조망;화흔시험화Transwell소실시험검측세포이유、삼유공간적천이능력;FN점부시험검측세포점부잠능.결과 A431세포전염psVEGF-shRNA후활성강저,세포주기발생조체,여대조조상비세포비솔현저증가,재G1기명현강저,재S기반세포조망증가.세포내VEGFmRNA화VEGF단백표체하강,세포천이화점부잠능력균수도억제(P＜0.05).결론 VEGF시인피부린암A431세포생장상관적중요기인,간우VEGF기인능유효억제A431세포적증식、천이화점부.
