中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2004年
12期
985-990
,共6页
崔京霞%纪剑飞%倪剑锋%吴文芳
崔京霞%紀劍飛%倪劍鋒%吳文芳
최경하%기검비%예검봉%오문방
铜绿假单胞菌%外毒素%基因克隆%IL-4突变体
銅綠假單胞菌%外毒素%基因剋隆%IL-4突變體
동록가단포균%외독소%기인극륭%IL-4돌변체
目的对铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列进行改造,以获得相对分子质量小、活性强的重组毒素PE38KDEL. 方法基于铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列的高GC含量,通过PCR反应和酶切技术,构建重组毒素PE38KDEL基因,并于大肠杆菌表达,用Western blot分析表达产物.为检测其生物活性,将其与靶向分子IL-4突变体cpIL4(13D)融合,构建融合蛋白表达载体,并于大肠杆菌表达,表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后,用MTT法检测其对表达IL-4受体的黑色素瘤细胞LiBr的细胞毒性. 结果成功构建了PE38KDEL基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达,表达量占细胞全蛋白的21%左右;构建了融合蛋白cpIL4(13D)-PE38KDEL,并于大肠杆菌AD494(DE3)中得到高效表达,纯化后融合蛋白的纯度达95%以上,细胞毒实验证明其对黑色素瘤细胞LiBr具有良好的杀伤作用,这说明改造后的PE38KDEL是具有细胞毒效应的. 结论重组毒素PE38KDEL的构建,为各种导向药物的构建奠定了基础.
目的對銅綠假單胞菌外毒素A的編碼序列進行改造,以穫得相對分子質量小、活性彊的重組毒素PE38KDEL. 方法基于銅綠假單胞菌外毒素A的編碼序列的高GC含量,通過PCR反應和酶切技術,構建重組毒素PE38KDEL基因,併于大腸桿菌錶達,用Western blot分析錶達產物.為檢測其生物活性,將其與靶嚮分子IL-4突變體cpIL4(13D)融閤,構建融閤蛋白錶達載體,併于大腸桿菌錶達,錶達產物經親和色譜和陰離子交換色譜純化後,用MTT法檢測其對錶達IL-4受體的黑色素瘤細胞LiBr的細胞毒性. 結果成功構建瞭PE38KDEL基因,併在大腸桿菌BL21(DE3)中得到瞭高效錶達,錶達量佔細胞全蛋白的21%左右;構建瞭融閤蛋白cpIL4(13D)-PE38KDEL,併于大腸桿菌AD494(DE3)中得到高效錶達,純化後融閤蛋白的純度達95%以上,細胞毒實驗證明其對黑色素瘤細胞LiBr具有良好的殺傷作用,這說明改造後的PE38KDEL是具有細胞毒效應的. 結論重組毒素PE38KDEL的構建,為各種導嚮藥物的構建奠定瞭基礎.
목적대동록가단포균외독소A적편마서렬진행개조,이획득상대분자질량소、활성강적중조독소PE38KDEL. 방법기우동록가단포균외독소A적편마서렬적고GC함량,통과PCR반응화매절기술,구건중조독소PE38KDEL기인,병우대장간균표체,용Western blot분석표체산물.위검측기생물활성,장기여파향분자IL-4돌변체cpIL4(13D)융합,구건융합단백표체재체,병우대장간균표체,표체산물경친화색보화음리자교환색보순화후,용MTT법검측기대표체IL-4수체적흑색소류세포LiBr적세포독성. 결과성공구건료PE38KDEL기인,병재대장간균BL21(DE3)중득도료고효표체,표체량점세포전단백적21%좌우;구건료융합단백cpIL4(13D)-PE38KDEL,병우대장간균AD494(DE3)중득도고효표체,순화후융합단백적순도체95%이상,세포독실험증명기대흑색소류세포LiBr구유량호적살상작용,저설명개조후적PE38KDEL시구유세포독효응적. 결론중조독소PE38KDEL적구건,위각충도향약물적구건전정료기출.
