华西口腔医学杂志
華西口腔醫學雜誌
화서구강의학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY
2003年
3期
174-176
,共3页
刘莉%贾文祥%李学如%张再容%马巨辉%周绍兵%陈恬
劉莉%賈文祥%李學如%張再容%馬巨輝%週紹兵%陳恬
류리%가문상%리학여%장재용%마거휘%주소병%진념
绿荧光蛋白%防龋%基因疫苗%转染
綠熒光蛋白%防齲%基因疫苗%轉染
록형광단백%방우%기인역묘%전염
目的构建一含绿荧光蛋白报告基因(gfp)的防龋基因疫苗,利用绿荧光蛋白特有的发光性质,示踪防龋基因疫苗在体外的表达情况.方法 采用PCR方法,以质粒pPC41为模板,扩增变形链球菌表面蛋白质抗原(PAC)分子的氨基端A区(pacA),以此作为基因防龋疫苗的目的基因片段,与质粒pEGFP-C1重组构建重组质粒pEGFPC1-pacA,并经酶切、测序鉴定;重组质粒瞬时转染COS1细胞后,通过荧光显微镜直接观察发绿色荧光的细胞,流式细胞仪检测转染细胞的荧光强度,RT-PCR扩增pacA基因片段检测重组质粒的体外表达情况.结果 重组质粒中的pacA片段完全来自pac全基因序列, pEGFPC1-pacA构建正确;荧光显微镜直接观察到了发绿色荧光的细胞,重组质粒转染细胞的荧光强度明显高于未转染细胞的荧光强度,并证实了重组质粒pacA片段能在哺乳动物细胞中被转录.结论 重组质粒中的绿荧光蛋白基因以及置于gfp基因之后的防龋基因片段均能在体外同时正确表达,为深入研究防龋基因疫苗的安全性及有效性提供了较好的材料.
目的構建一含綠熒光蛋白報告基因(gfp)的防齲基因疫苗,利用綠熒光蛋白特有的髮光性質,示蹤防齲基因疫苗在體外的錶達情況.方法 採用PCR方法,以質粒pPC41為模闆,擴增變形鏈毬菌錶麵蛋白質抗原(PAC)分子的氨基耑A區(pacA),以此作為基因防齲疫苗的目的基因片段,與質粒pEGFP-C1重組構建重組質粒pEGFPC1-pacA,併經酶切、測序鑒定;重組質粒瞬時轉染COS1細胞後,通過熒光顯微鏡直接觀察髮綠色熒光的細胞,流式細胞儀檢測轉染細胞的熒光彊度,RT-PCR擴增pacA基因片段檢測重組質粒的體外錶達情況.結果 重組質粒中的pacA片段完全來自pac全基因序列, pEGFPC1-pacA構建正確;熒光顯微鏡直接觀察到瞭髮綠色熒光的細胞,重組質粒轉染細胞的熒光彊度明顯高于未轉染細胞的熒光彊度,併證實瞭重組質粒pacA片段能在哺乳動物細胞中被轉錄.結論 重組質粒中的綠熒光蛋白基因以及置于gfp基因之後的防齲基因片段均能在體外同時正確錶達,為深入研究防齲基因疫苗的安全性及有效性提供瞭較好的材料.
목적구건일함록형광단백보고기인(gfp)적방우기인역묘,이용록형광단백특유적발광성질,시종방우기인역묘재체외적표체정황.방법 채용PCR방법,이질립pPC41위모판,확증변형련구균표면단백질항원(PAC)분자적안기단A구(pacA),이차작위기인방우역묘적목적기인편단,여질립pEGFP-C1중조구건중조질립pEGFPC1-pacA,병경매절、측서감정;중조질립순시전염COS1세포후,통과형광현미경직접관찰발록색형광적세포,류식세포의검측전염세포적형광강도,RT-PCR확증pacA기인편단검측중조질립적체외표체정황.결과 중조질립중적pacA편단완전래자pac전기인서렬, pEGFPC1-pacA구건정학;형광현미경직접관찰도료발록색형광적세포,중조질립전염세포적형광강도명현고우미전염세포적형광강도,병증실료중조질립pacA편단능재포유동물세포중피전록.결론 중조질립중적록형광단백기인이급치우gfp기인지후적방우기인편단균능재체외동시정학표체,위심입연구방우기인역묘적안전성급유효성제공료교호적재료.
