生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
220-223
,共4页
巴斯德毕赤酵母%表达载体%蔗糖转化酶基因%甘露聚糖酶%表达
巴斯德畢赤酵母%錶達載體%蔗糖轉化酶基因%甘露聚糖酶%錶達
파사덕필적효모%표체재체%자당전화매기인%감로취당매%표체
目的:构建以带自身启动子的蔗糖转化酶基因(suc2)为选择标记的载体,用于外源基因在巴斯德毕赤酵母中的正确分泌表达.方法:根据已发表的蔗糖转化酶基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术,以啤酒酵母INVSC1总DNA为模板,扩增出包含自身启动子和终止区序列的suc2基因.将该基因与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了以suc2为选择标记的表达载体pPIC12K.将甘露聚糖酶基因man克隆入载体pPIC12K,用PEG/LiCl法转化毕赤酵母GS115菌株.以蔗糖为惟一碳源筛选转化子,利用底物平板检测筛选到的转化子中man基因的表达,并对重组表达菌株进行连续传代实验.结果:部分转化子周围产生明显的水解圈,证明甘露聚糖酶已经得到分泌表达;对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的遗传稳定性.结论:以带自身启动子的suc2基因为选择标记的表达载体构建成功,并且这个新型表达载体能够对外源基因进行稳定有效的分泌表达.
目的:構建以帶自身啟動子的蔗糖轉化酶基因(suc2)為選擇標記的載體,用于外源基因在巴斯德畢赤酵母中的正確分泌錶達.方法:根據已髮錶的蔗糖轉化酶基因序列設計併閤成1對引物,應用PCR技術,以啤酒酵母INVSC1總DNA為模闆,擴增齣包含自身啟動子和終止區序列的suc2基因.將該基因與畢赤酵母錶達載體pPIC9K連接,構建瞭以suc2為選擇標記的錶達載體pPIC12K.將甘露聚糖酶基因man剋隆入載體pPIC12K,用PEG/LiCl法轉化畢赤酵母GS115菌株.以蔗糖為惟一碳源篩選轉化子,利用底物平闆檢測篩選到的轉化子中man基因的錶達,併對重組錶達菌株進行連續傳代實驗.結果:部分轉化子週圍產生明顯的水解圈,證明甘露聚糖酶已經得到分泌錶達;對重組錶達菌株的連續傳代實驗證實瞭該錶達載體具有良好的遺傳穩定性.結論:以帶自身啟動子的suc2基因為選擇標記的錶達載體構建成功,併且這箇新型錶達載體能夠對外源基因進行穩定有效的分泌錶達.
목적:구건이대자신계동자적자당전화매기인(suc2)위선택표기적재체,용우외원기인재파사덕필적효모중적정학분비표체.방법:근거이발표적자당전화매기인서렬설계병합성1대인물,응용PCR기술,이비주효모INVSC1총DNA위모판,확증출포함자신계동자화종지구서렬적suc2기인.장해기인여필적효모표체재체pPIC9K련접,구건료이suc2위선택표기적표체재체pPIC12K.장감로취당매기인man극륭입재체pPIC12K,용PEG/LiCl법전화필적효모GS115균주.이자당위유일탄원사선전화자,이용저물평판검측사선도적전화자중man기인적표체,병대중조표체균주진행련속전대실험.결과:부분전화자주위산생명현적수해권,증명감로취당매이경득도분비표체;대중조표체균주적련속전대실험증실료해표체재체구유량호적유전은정성.결론:이대자신계동자적suc2기인위선택표기적표체재체구건성공,병차저개신형표체재체능구대외원기인진행은정유효적분비표체.
