生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2009年
6期
709-714
,共6页
向波%王理%易梅%欧阳珏%李夏雨%张祖萍%李小玲%李桂源
嚮波%王理%易梅%歐暘玨%李夏雨%張祖萍%李小玲%李桂源
향파%왕리%역매%구양각%리하우%장조평%리소령%리계원
NOR1%酵母双杂交%OSCP%蛋白质相互作用
NOR1%酵母雙雜交%OSCP%蛋白質相互作用
NOR1%효모쌍잡교%OSCP%단백질상호작용
NOR1基因是新的鼻咽癌相关基因,该基因在鼻咽癌细胞系HNE1和鼻咽癌组织中表达下调.在鼻咽癌细胞HNE1中恢复NOR1基因表达抑制了鼻咽癌细胞的生长和增殖能力.为了探讨NOR1基因的生物学功能,以NOR1基因为诱饵运用酵母双杂交技术在人胎脑文库中筛选其交互作用蛋白,挑选阳性克隆,进行DNA序列分析和同源检索,阳性克隆编码7个不同的蛋白质,其中一个阳性克隆编码线粒体ATP合成酶亚基OSCP蛋白.瞬时转染pCMV-myc-NOR1质粒进入鼻咽癌5-8F细胞,通过密度梯度离心法分离线粒体蛋白,Western blot检测表明myc-NOR1蛋白分布于线粒体与胞浆.免疫荧光检测表明在鼻咽正常上皮细胞NP69中内源性NOR1蛋白与线粒体存在明显共定位.随后采用特异性酵母双杂交、免疫荧光共定位、免疫共沉淀技术证实了NO.1与OSCP在线粒体内存在交互作用.提示,NOR1是一个新的线粒体蛋白,可能通过结合OSCP蛋白调控细胞能量代谢,为深入探讨其功能提供了重要线索.
NOR1基因是新的鼻嚥癌相關基因,該基因在鼻嚥癌細胞繫HNE1和鼻嚥癌組織中錶達下調.在鼻嚥癌細胞HNE1中恢複NOR1基因錶達抑製瞭鼻嚥癌細胞的生長和增殖能力.為瞭探討NOR1基因的生物學功能,以NOR1基因為誘餌運用酵母雙雜交技術在人胎腦文庫中篩選其交互作用蛋白,挑選暘性剋隆,進行DNA序列分析和同源檢索,暘性剋隆編碼7箇不同的蛋白質,其中一箇暘性剋隆編碼線粒體ATP閤成酶亞基OSCP蛋白.瞬時轉染pCMV-myc-NOR1質粒進入鼻嚥癌5-8F細胞,通過密度梯度離心法分離線粒體蛋白,Western blot檢測錶明myc-NOR1蛋白分佈于線粒體與胞漿.免疫熒光檢測錶明在鼻嚥正常上皮細胞NP69中內源性NOR1蛋白與線粒體存在明顯共定位.隨後採用特異性酵母雙雜交、免疫熒光共定位、免疫共沉澱技術證實瞭NO.1與OSCP在線粒體內存在交互作用.提示,NOR1是一箇新的線粒體蛋白,可能通過結閤OSCP蛋白調控細胞能量代謝,為深入探討其功能提供瞭重要線索.
NOR1기인시신적비인암상관기인,해기인재비인암세포계HNE1화비인암조직중표체하조.재비인암세포HNE1중회복NOR1기인표체억제료비인암세포적생장화증식능력.위료탐토NOR1기인적생물학공능,이NOR1기인위유이운용효모쌍잡교기술재인태뇌문고중사선기교호작용단백,도선양성극륭,진행DNA서렬분석화동원검색,양성극륭편마7개불동적단백질,기중일개양성극륭편마선립체ATP합성매아기OSCP단백.순시전염pCMV-myc-NOR1질립진입비인암5-8F세포,통과밀도제도리심법분리선립체단백,Western blot검측표명myc-NOR1단백분포우선립체여포장.면역형광검측표명재비인정상상피세포NP69중내원성NOR1단백여선립체존재명현공정위.수후채용특이성효모쌍잡교、면역형광공정위、면역공침정기술증실료NO.1여OSCP재선립체내존재교호작용.제시,NOR1시일개신적선립체단백,가능통과결합OSCP단백조공세포능량대사,위심입탐토기공능제공료중요선색.
