检验医学
檢驗醫學
검험의학
LABORATORY MEDICINE
2010年
8期
596-600
,共5页
胰岛素受体底物-1%脂质过氧化物酶体增殖物激活受体γ%RNA干扰%3T3-L1前脂肪细胞
胰島素受體底物-1%脂質過氧化物酶體增殖物激活受體γ%RNA榦擾%3T3-L1前脂肪細胞
이도소수체저물-1%지질과양화물매체증식물격활수체γ%RNA간우%3T3-L1전지방세포
目的 观察胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因表达受阻对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化和脂质过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响.方法 针对小鼠IRS-1基因开放阅读框上的2个区域合成短发夹核糖核酸[shRNA(M和MH)],以pGenesil-1 vector为载体构建带绿色荧光蛋白(GFP)靶标的shRNA质粒.以脂质体LipofectaminTM2000介导转染3T3-L1前脂肪细胞,并设阴性对照(HK)载体转染组.细胞转染后,G418筛选稳定表达的阳性克隆并通过免疫印迹法鉴定.应用0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、10-6 mol/L地塞米松(DEX)和5 μg/mL胰岛素(Ins)分别诱导小鼠3T3-L1前脂肪细胞空白对照组、HK载体转染组、M和MH转染组分化,在诱导分化的不同时间点收集细胞.用免疫印迹法检测PPARγ的表达.脂肪细胞内脂滴用油红O染色观察.结果 与空白对照组、HK组和转染M组IRS-1 shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞相比,转染MH组IRS-1 shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞IRS-1蛋白表达水平降低70%以上;而MH转染组细胞PPARγ蛋白的表达与前3组3T3-L1前脂肪细胞比较无改变.前3组3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞成功,PPARγ蛋白的表达在脂肪细胞分化成熟过程中逐渐增高.油红O染色显示,随着脂肪细胞的分化成熟,桔红色脂滴逐渐增多;而转染MH组IRS-1 shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞经诱导,油红O染色桔红色脂滴显着减少,直到分化的第8天,才见少许桔红色脂滴,且PPARγ蛋白的表达无变化.结论 IRS-1基因沉默后可抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,并在分化过程中抑制PPARγ的表达,说明IRS-1通过调节PPARγ的表达或与PPARγ共同作用在3T3-L1前脂肪细胞的分化中发挥决定性作用.
目的 觀察胰島素受體底物-1(IRS-1)基因錶達受阻對小鼠3T3-L1前脂肪細胞分化和脂質過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)錶達的影響.方法 針對小鼠IRS-1基因開放閱讀框上的2箇區域閤成短髮夾覈糖覈痠[shRNA(M和MH)],以pGenesil-1 vector為載體構建帶綠色熒光蛋白(GFP)靶標的shRNA質粒.以脂質體LipofectaminTM2000介導轉染3T3-L1前脂肪細胞,併設陰性對照(HK)載體轉染組.細胞轉染後,G418篩選穩定錶達的暘性剋隆併通過免疫印跡法鑒定.應用0.5 mmol/L 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)、10-6 mol/L地塞米鬆(DEX)和5 μg/mL胰島素(Ins)分彆誘導小鼠3T3-L1前脂肪細胞空白對照組、HK載體轉染組、M和MH轉染組分化,在誘導分化的不同時間點收集細胞.用免疫印跡法檢測PPARγ的錶達.脂肪細胞內脂滴用油紅O染色觀察.結果 與空白對照組、HK組和轉染M組IRS-1 shRNA質粒的3T3-L1前脂肪細胞相比,轉染MH組IRS-1 shRNA質粒的3T3-L1前脂肪細胞IRS-1蛋白錶達水平降低70%以上;而MH轉染組細胞PPARγ蛋白的錶達與前3組3T3-L1前脂肪細胞比較無改變.前3組3T3-L1前脂肪細胞誘導分化為成熟脂肪細胞成功,PPARγ蛋白的錶達在脂肪細胞分化成熟過程中逐漸增高.油紅O染色顯示,隨著脂肪細胞的分化成熟,桔紅色脂滴逐漸增多;而轉染MH組IRS-1 shRNA質粒的3T3-L1前脂肪細胞經誘導,油紅O染色桔紅色脂滴顯著減少,直到分化的第8天,纔見少許桔紅色脂滴,且PPARγ蛋白的錶達無變化.結論 IRS-1基因沉默後可抑製3T3-L1前脂肪細胞的分化,併在分化過程中抑製PPARγ的錶達,說明IRS-1通過調節PPARγ的錶達或與PPARγ共同作用在3T3-L1前脂肪細胞的分化中髮揮決定性作用.
목적 관찰이도소수체저물-1(IRS-1)기인표체수조대소서3T3-L1전지방세포분화화지질과양화물매체증식물격활수체γ(PPARγ)표체적영향.방법 침대소서IRS-1기인개방열독광상적2개구역합성단발협핵당핵산[shRNA(M화MH)],이pGenesil-1 vector위재체구건대록색형광단백(GFP)파표적shRNA질립.이지질체LipofectaminTM2000개도전염3T3-L1전지방세포,병설음성대조(HK)재체전염조.세포전염후,G418사선은정표체적양성극륭병통과면역인적법감정.응용0.5 mmol/L 3-이정기-1-갑기황표령(IBMX)、10-6 mol/L지새미송(DEX)화5 μg/mL이도소(Ins)분별유도소서3T3-L1전지방세포공백대조조、HK재체전염조、M화MH전염조분화,재유도분화적불동시간점수집세포.용면역인적법검측PPARγ적표체.지방세포내지적용유홍O염색관찰.결과 여공백대조조、HK조화전염M조IRS-1 shRNA질립적3T3-L1전지방세포상비,전염MH조IRS-1 shRNA질립적3T3-L1전지방세포IRS-1단백표체수평강저70%이상;이MH전염조세포PPARγ단백적표체여전3조3T3-L1전지방세포비교무개변.전3조3T3-L1전지방세포유도분화위성숙지방세포성공,PPARγ단백적표체재지방세포분화성숙과정중축점증고.유홍O염색현시,수착지방세포적분화성숙,길홍색지적축점증다;이전염MH조IRS-1 shRNA질립적3T3-L1전지방세포경유도,유홍O염색길홍색지적현착감소,직도분화적제8천,재견소허길홍색지적,차PPARγ단백적표체무변화.결론 IRS-1기인침묵후가억제3T3-L1전지방세포적분화,병재분화과정중억제PPARγ적표체,설명IRS-1통과조절PPARγ적표체혹여PPARγ공동작용재3T3-L1전지방세포적분화중발휘결정성작용.
