猪γ干扰素的表达及抗病毒活性研究
저γ간우소적표체급항병독활성연구
The Prokaryotic Expression and Its Antiviral Activity of Porcine Interferon-γ
  • 万方数据
    湖北农业科学 호북농업과학

    2011年 11期 2283-2286 ,共4页

    梁望旺%周丹娜%杨克礼%刘泽文%段正赢%邓均华%郭锐%袁芳艳%徐涤平%田永祥

    량망왕%주단나%양극례%류택문%단정영%산균화%곽예%원방염%서조평%전영상

    猪γ干扰素%克隆%原核表达 豬γ榦擾素%剋隆%原覈錶達
    저γ간우소%극륭%원핵표체
    利用RT-PCR技术从有丝分裂原刀豆素(ConA)诱导的长白猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出猪γ干扰素的成熟肽基因(mPolFN-γ),并将其亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-mPoIFN-γ.经PCR、酶切及测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测,表明猪γ干扰素获得了高效表达,并具有免疫活性,表达产物约为20.5 kDa,主要以包涵体形式存在,产物经纯化、复性得到具有生物学活性的蛋白.利用细胞病变抑制法对其在H-PRRSV/Marc-145系统上进行抗病毒活性测定,结果表明其抗H-PRRSV活性为7.68×103U/mg.为进一步研究猪γ干扰素功能奠定了基础和理论依据.
    이용RT-PCR기술종유사분렬원도두소(ConA)유도적장백저외주혈림파세포총RNA중확증출저γ간우소적성숙태기인(mPolFN-γ),병장기아극륭도원핵표체재체pET-28a중,구건중조표체재체pET-mPoIFN-γ.경PCR、매절급측서감정후,전화도대장간균BL21(DE3)진행IPTG유도표체,경SDS-PAGE화Western-blot검측,표명저γ간우소획득료고효표체,병구유면역활성,표체산물약위20.5 kDa,주요이포함체형식존재,산물경순화、복성득도구유생물학활성적단백.이용세포병변억제법대기재H-PRRSV/Marc-145계통상진행항병독활성측정,결과표명기항H-PRRSV활성위7.68×103U/mg.위진일보연구저γ간우소공능전정료기출화이론의거.
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