岭南心血管病杂志
嶺南心血管病雜誌
령남심혈관병잡지
SOUTH CHINA JOURNAL OF CARDIOLOGY
2011年
5期
402-405
,共4页
雷和平%姚轻舟%刘居理%林秋雄%邓春玉%朱杰宁%余细勇
雷和平%姚輕舟%劉居理%林鞦雄%鄧春玉%硃傑寧%餘細勇
뢰화평%요경주%류거리%림추웅%산춘옥%주걸저%여세용
基因%血管紧张素转换酶2%点突变%质粒
基因%血管緊張素轉換酶2%點突變%質粒
기인%혈관긴장소전환매2%점돌변%질립
目的 构建人野生型和突变型( A294G)血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因真核表达载体.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人ACE2基因,与pcDNA3.1真核表达载体连接,构建pcDNA3.1-hACE2重组质粒,通过酶切和测序进行鉴定；以此野生型ACE2真核表达载体为模板,在pyrobest DNA高保真聚合酶的作用下利用体外定点突变法构建ACE2基因突变型重组质粒,用DpnI限制性内切酶处理聚合酶链反应产物,直接转化DH5α感受态细胞,挑取克隆并提取相应质粒,测序加以验证.结果 测序结果证实,野生型和突变型ACE2基因分别插入到pcDNA3.1+中,野生型ACE2基因序列与NCBI网站人ACE2基因全长编码序列(NCBI参考序列:NM_21804.2)相应片段一致,突变型(A294G) ACE2基因除第294位碱基A被G替代以外,其余序列与野生型一致.结论 成功构建了人野生型和突变型ACE2的真核表达质粒,为下一步研究突变型ACE2的生物学功能以及ACE2在疾病发病机制中的作用奠定了基础.
目的 構建人野生型和突變型( A294G)血管緊張素轉換酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因真覈錶達載體.方法 採用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法擴增人ACE2基因,與pcDNA3.1真覈錶達載體連接,構建pcDNA3.1-hACE2重組質粒,通過酶切和測序進行鑒定；以此野生型ACE2真覈錶達載體為模闆,在pyrobest DNA高保真聚閤酶的作用下利用體外定點突變法構建ACE2基因突變型重組質粒,用DpnI限製性內切酶處理聚閤酶鏈反應產物,直接轉化DH5α感受態細胞,挑取剋隆併提取相應質粒,測序加以驗證.結果 測序結果證實,野生型和突變型ACE2基因分彆插入到pcDNA3.1+中,野生型ACE2基因序列與NCBI網站人ACE2基因全長編碼序列(NCBI參攷序列:NM_21804.2)相應片段一緻,突變型(A294G) ACE2基因除第294位堿基A被G替代以外,其餘序列與野生型一緻.結論 成功構建瞭人野生型和突變型ACE2的真覈錶達質粒,為下一步研究突變型ACE2的生物學功能以及ACE2在疾病髮病機製中的作用奠定瞭基礎.
목적 구건인야생형화돌변형( A294G)혈관긴장소전환매2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)기인진핵표체재체.방법 채용역전록취합매련반응(RT-PCR)방법확증인ACE2기인,여pcDNA3.1진핵표체재체련접,구건pcDNA3.1-hACE2중조질립,통과매절화측서진행감정；이차야생형ACE2진핵표체재체위모판,재pyrobest DNA고보진취합매적작용하이용체외정점돌변법구건ACE2기인돌변형중조질립,용DpnI한제성내절매처리취합매련반응산물,직접전화DH5α감수태세포,도취극륭병제취상응질립,측서가이험증.결과 측서결과증실,야생형화돌변형ACE2기인분별삽입도pcDNA3.1+중,야생형ACE2기인서렬여NCBI망참인ACE2기인전장편마서렬(NCBI삼고서렬:NM_21804.2)상응편단일치,돌변형(A294G) ACE2기인제제294위감기A피G체대이외,기여서렬여야생형일치.결론 성공구건료인야생형화돌변형ACE2적진핵표체질립,위하일보연구돌변형ACE2적생물학공능이급ACE2재질병발병궤제중적작용전정료기출.
