湖南农业大学学报（自然科学版）
湖南農業大學學報（自然科學版）
호남농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HUNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
2011年
6期
659-664
,共6页
徐诗英%李婧慧%邹勇%刘林%贡成良%曹广力%薛仁宇%陈辉
徐詩英%李婧慧%鄒勇%劉林%貢成良%曹廣力%薛仁宇%陳輝
서시영%리청혜%추용%류림%공성량%조엄력%설인우%진휘
草鱼呼肠孤病毒%VP7蛋白%重组疫苗%免疫效力
草魚呼腸孤病毒%VP7蛋白%重組疫苗%免疫效力
초어호장고병독%VP7단백%중조역묘%면역효력
为探明呼肠孤病毒(GCRV)外衣壳蛋白VP7基因工程亚单位疫苗产生的抗体效价水平和免疫保护力,用RT-PCR方法,从GCRV中扩增到VP7基因片段,并克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,得到重组质粒pET-VP7,酶切鉴定后,将pET-VP7转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,产生的重组蛋白经变性和复性后,按0.5、1.0、2.0 mg/尾的注射剂量分为3个免疫组,以等体积的氢氧化铝为佐剂进行注射.经SDS-PAGE电泳分析,发现了相对分子质量为34 000的蛋白表达带；Western Blot检测结果显示表达的蛋白具有很好的抗原性；间接凝集试验结果表明,3个免疫组均有抗体产生；攻毒试验结果表明,0.5、1.0、2.0 mg/尾重组蛋白剂量组的保护率分别为90％、85％、90％,对照组为0,表明所构建的疫苗具有较好的免疫作用.
為探明呼腸孤病毒(GCRV)外衣殼蛋白VP7基因工程亞單位疫苗產生的抗體效價水平和免疫保護力,用RT-PCR方法,從GCRV中擴增到VP7基因片段,併剋隆至原覈錶達載體pET-28a(+)中,得到重組質粒pET-VP7,酶切鑒定後,將pET-VP7轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導錶達,產生的重組蛋白經變性和複性後,按0.5、1.0、2.0 mg/尾的註射劑量分為3箇免疫組,以等體積的氫氧化鋁為佐劑進行註射.經SDS-PAGE電泳分析,髮現瞭相對分子質量為34 000的蛋白錶達帶；Western Blot檢測結果顯示錶達的蛋白具有很好的抗原性；間接凝集試驗結果錶明,3箇免疫組均有抗體產生；攻毒試驗結果錶明,0.5、1.0、2.0 mg/尾重組蛋白劑量組的保護率分彆為90％、85％、90％,對照組為0,錶明所構建的疫苗具有較好的免疫作用.
위탐명호장고병독(GCRV)외의각단백VP7기인공정아단위역묘산생적항체효개수평화면역보호력,용RT-PCR방법,종GCRV중확증도VP7기인편단,병극륭지원핵표체재체pET-28a(+)중,득도중조질립pET-VP7,매절감정후,장pET-VP7전화도대장간균BL21(DE3)중진행유도표체,산생적중조단백경변성화복성후,안0.5、1.0、2.0 mg/미적주사제량분위3개면역조,이등체적적경양화려위좌제진행주사.경SDS-PAGE전영분석,발현료상대분자질량위34 000적단백표체대；Western Blot검측결과현시표체적단백구유흔호적항원성；간접응집시험결과표명,3개면역조균유항체산생；공독시험결과표명,0.5、1.0、2.0 mg/미중조단백제량조적보호솔분별위90％、85％、90％,대조조위0,표명소구건적역묘구유교호적면역작용.
