中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
9期
50-53
,共4页
张继希%张志远%张宜娜%周永辉%张祥%郝一妹%张元元%夏平安%崔保安
張繼希%張誌遠%張宜娜%週永輝%張祥%郝一妹%張元元%夏平安%崔保安
장계희%장지원%장의나%주영휘%장상%학일매%장원원%하평안%최보안
唾液酸黏附素%克隆%原核表达%多克隆抗体
唾液痠黏附素%剋隆%原覈錶達%多剋隆抗體
타액산점부소%극륭%원핵표체%다극륭항체
本试验旨在克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体.试验中应用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-Sn150,成功表达了分子质量大小约为43.1 ku的γ亚单位重组蛋白.将重组蛋白pET-Sn150免疫小鼠,制备获得鼠抗pET-Sn150重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1∶12800; Western blotting试验结果证明,制备的鼠抗pET-Sn150多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性.本试验克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因并成功表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础.
本試驗旨在剋隆齣豬唾液痠黏附素的近氨基耑結構域基因,進而構建原覈錶達載體併誘導錶達重組蛋白,以製備多剋隆抗體.試驗中應用RT-PCR技術從健康仔豬肺巨噬細胞中剋隆齣豬唾液痠黏附素的近氨基耑結構域的cDNA序列,併將其亞剋隆到原覈錶達載體pET-32a中,構建重組錶達質粒pET-Sn150,成功錶達瞭分子質量大小約為43.1 ku的γ亞單位重組蛋白.將重組蛋白pET-Sn150免疫小鼠,製備穫得鼠抗pET-Sn150重組蛋白多剋隆抗體,將得到的重組蛋白多剋隆抗體採用間接ELISA和Western blotting試驗方法檢測,ELISA測定多剋隆抗體的血清效價為1∶12800; Western blotting試驗結果證明,製備的鼠抗pET-Sn150多剋隆抗體可以與重組蛋白進行特異性結閤,從而證明重組蛋白具有較好的免疫原性.本試驗剋隆齣豬唾液痠黏附素的近氨基耑結構域基因併成功錶達,為進一步研究其結構與功能奠定瞭基礎.
본시험지재극륭출저타액산점부소적근안기단결구역기인,진이구건원핵표체재체병유도표체중조단백,이제비다극륭항체.시험중응용RT-PCR기술종건강자저폐거서세포중극륭출저타액산점부소적근안기단결구역적cDNA서렬,병장기아극륭도원핵표체재체pET-32a중,구건중조표체질립pET-Sn150,성공표체료분자질량대소약위43.1 ku적γ아단위중조단백.장중조단백pET-Sn150면역소서,제비획득서항pET-Sn150중조단백다극륭항체,장득도적중조단백다극륭항체채용간접ELISA화Western blotting시험방법검측,ELISA측정다극륭항체적혈청효개위1∶12800; Western blotting시험결과증명,제비적서항pET-Sn150다극륭항체가이여중조단백진행특이성결합,종이증명중조단백구유교호적면역원성.본시험극륭출저타액산점부소적근안기단결구역기인병성공표체,위진일보연구기결구여공능전정료기출.
