CAJ | 학술논문

目的建立从人肾癌组织中提取、纯化热休克蛋白(HSP)gp96-肽复合物的方法,并检测其体外免疫效应.方法采取三步蛋白纯化法从人肾癌患者肿瘤组织中提取、纯化HSPgp96-肽复合物,SDS-PAGE、Western blot鉴定HSPgp96-肽复合物.应用酶联免疫斑点(ELISPOT)法检测HSPgp96-肽复合物、单纯多肽产生γ-干扰素效应T细胞频数的体外免疫活性.结果应用该方法提取的蛋白质经SDS-PAGE和Western blot特异性鉴定,证实是HSPgp96-肽复合物;蛋白得率为每g湿重肾癌组织可纯化HSPgp96-肽复合物40～60 μg.γ-干扰素 ELISPOT检测,HSPgp96-肽复合物组产生γ-干扰素效应T细胞频数最高(287.50±22.34),以后依次为单纯多肽组(135.25±12.80)、阳性对照组组(102.25±14.76)、阴性对照组(35.50±11.10),各组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);HSPgp96-肽复合物组与单纯多肽组、阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);单纯多肽组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论三步蛋白纯化法不仅操作简便、重复性高,而且提取的HSPgp96-肽复合物具有高获率、高纯度、高特异性及高免疫效应等优点.
목적건립종인신암조직중제취、순화열휴극단백(HSP)gp96-태복합물적방법,병검측기체외면역효응.방법채취삼보단백순화법종인신암환자종류조직중제취、순화HSPgp96-태복합물,SDS-PAGE、Western blot감정HSPgp96-태복합물.응용매련면역반점(ELISPOT)법검측HSPgp96-태복합물、단순다태산생γ-간우소효응T세포빈수적체외면역활성.결과응용해방법제취적단백질경SDS-PAGE화Western blot특이성감정,증실시HSPgp96-태복합물;단백득솔위매g습중신암조직가순화HSPgp96-태복합물40～60 μg.γ-간우소 ELISPOT검측,HSPgp96-태복합물조산생γ-간우소효응T세포빈수최고(287.50±22.34),이후의차위단순다태조(135.25±12.80)、양성대조조조(102.25±14.76)、음성대조조(35.50±11.10),각조여음성대조조비교차이유통계학의의(P<0.05);HSPgp96-태복합물조여단순다태조、양성대조조비교차이유통계학의의(P<0.05);단순다태조여양성대조조비교차이무통계학의의(P>0.05).결론삼보단백순화법불부조작간편、중복성고,이차제취적HSPgp96-태복합물구유고획솔、고순도、고특이성급고면역효응등우점.