CAJ | 학술논문

目的构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测联合60Co γ射线照射对U251细胞STAT3表达及细胞增殖的抑制作用.方法设计、合成STAT3特异性的19 bp短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilence2.1-U6-H1载体中,构建STAT3特异siRNA的表达载体,Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切及测序鉴定重组体,并转染U251细胞,免疫印迹法(Western blot)检测STAT3 mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,克隆形成率及MTT实验确定放疗剂量.结果经双酶切与测序鉴定成功构建pSilence2.1-STAT3表达载体,转染星形胶质瘤细胞株U251细胞可显著抑制细胞中STAT3蛋白的表达水平;确定2 Gy为放疗剂量.转染pSilence2.1-STAT3,细胞增殖活性较未转染U251细胞显著降低(P＜0.05),联合60Co γ射线照射U251细胞增殖活性单独转染进一步显著降低(P＜0.05).结论运用pSilence2.1-U6-H1载体构建的pSilence2.1-STAT3表达载体可有效抑制STAT3的表达及星形胶质瘤细胞的增殖;联合2 Gy 60Co γ射线照射可增加抑制效果.
목적 구건특이성억제신호전도여전록격활인자3(STAT3)적소간우RNA(siRNA)표체재체병검측연합60Co γ사선조사대U251세포STAT3표체급세포증식적억제작용.방법 설계、합성STAT3특이성적19 bp단련과핵감산,경퇴화형성쌍련DNA편단,극륭도pSilence2.1-U6-H1재체중,구건STAT3특이siRNA적표체재체,Hind Ⅲ화BamH Ⅰ쌍매절급측서감정중조체,병전염U251세포,면역인적법(Western blot)검측STAT3 mRNA화단백적표체수평,사갑기우담서람(MTT)검측세포증식활성,극륭형성솔급MTT실험학정방료제량.결과 경쌍매절여측서감정성공구건pSilence2.1-STAT3표체재체,전염성형효질류세포주U251세포가현저억제세포중STAT3단백적표체수평;학정2 Gy위방료제량.전염pSilence2.1-STAT3,세포증식활성교미전염U251세포현저강저(P＜0.05),연합60Co γ사선조사U251세포증식활성단독전염진일보현저강저(P＜0.05).결론 운용pSilence2.1-U6-H1재체구건적pSilence2.1-STAT3표체재체가유효억제STAT3적표체급성형효질류세포적증식;연합2 Gy 60Co γ사선조사가증가억제효과.