中华儿科杂志
中華兒科雜誌
중화인과잡지
Chinese Journal of Pediatrics
2007年
7期
494-497
,共4页
毛华雄%易著文%吴小川%党西强%何小解%曹艳%莫双红
毛華雄%易著文%吳小川%黨西彊%何小解%曹豔%莫雙紅
모화웅%역저문%오소천%당서강%하소해%조염%막쌍홍
RNA,小分子干扰%转化生长因子β%肾小球膜%大鼠,SPRAGUE-DAWLEY%纤维连接蛋白类
RNA,小分子榦擾%轉化生長因子β%腎小毬膜%大鼠,SPRAGUE-DAWLEY%纖維連接蛋白類
RNA,소분자간우%전화생장인자β%신소구막%대서,SPRAGUE-DAWLEY%섬유련접단백류
目的利用能够表达大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)siRNA的绿色荧光蛋白融合表达质粒载体(pGEFP-C1)转染SD大鼠系膜细胞系、干扰TGF-β1的表达,观察系膜细胞纤维连接蛋白(FN)的相应变化,探讨防治肾脏纤维化的新途径.方法 根据大鼠TGF-β1基因序列第538-556(A)和895-913(B)核苷酸序列,将A、B二段序列分别构建成小发夹结构,分别(A/B)或共同(A+B)插入一个pGEFP-C1载体中,得到3个重组载体,能够分别或同时表达针对A或(和)B序列的siRNA,分别转染系膜细胞后,通过ELISA和RT-PCR动态观察系膜细胞TGF-β1、FN的mRNA和细胞培养上清中蛋白浓度的变化,探讨二者变化的相互关系.结果 载体表达的siRNA与TGF-β1基因第538-556序列相同者,能够显著干扰48 h时间段TGF-β1 mRNA(RT-PCR)(P＜0.01)和蛋白分泌(细胞上清ELISA)(P＜0.01),脂质体转染刺激系膜细胞FN分泌显著增加,表现为对照组和TGF-β1未被有效干扰组,FN分泌于24 h时段达到峰值,而TGF-β1被干扰的实验组,FN峰值被推迟到48 h才出现(P＜0.01).结论 siRNA干扰系膜细胞TGF-β1的表达,能够减少FN的表达,但FN的表达可能并不完全依赖于TGF-β1.
目的利用能夠錶達大鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)siRNA的綠色熒光蛋白融閤錶達質粒載體(pGEFP-C1)轉染SD大鼠繫膜細胞繫、榦擾TGF-β1的錶達,觀察繫膜細胞纖維連接蛋白(FN)的相應變化,探討防治腎髒纖維化的新途徑.方法 根據大鼠TGF-β1基因序列第538-556(A)和895-913(B)覈苷痠序列,將A、B二段序列分彆構建成小髮夾結構,分彆(A/B)或共同(A+B)插入一箇pGEFP-C1載體中,得到3箇重組載體,能夠分彆或同時錶達針對A或(和)B序列的siRNA,分彆轉染繫膜細胞後,通過ELISA和RT-PCR動態觀察繫膜細胞TGF-β1、FN的mRNA和細胞培養上清中蛋白濃度的變化,探討二者變化的相互關繫.結果 載體錶達的siRNA與TGF-β1基因第538-556序列相同者,能夠顯著榦擾48 h時間段TGF-β1 mRNA(RT-PCR)(P＜0.01)和蛋白分泌(細胞上清ELISA)(P＜0.01),脂質體轉染刺激繫膜細胞FN分泌顯著增加,錶現為對照組和TGF-β1未被有效榦擾組,FN分泌于24 h時段達到峰值,而TGF-β1被榦擾的實驗組,FN峰值被推遲到48 h纔齣現(P＜0.01).結論 siRNA榦擾繫膜細胞TGF-β1的錶達,能夠減少FN的錶達,但FN的錶達可能併不完全依賴于TGF-β1.
목적이용능구표체대서전화생장인자β1(TGF-β1)siRNA적록색형광단백융합표체질립재체(pGEFP-C1)전염SD대서계막세포계、간우TGF-β1적표체,관찰계막세포섬유련접단백(FN)적상응변화,탐토방치신장섬유화적신도경.방법 근거대서TGF-β1기인서렬제538-556(A)화895-913(B)핵감산서렬,장A、B이단서렬분별구건성소발협결구,분별(A/B)혹공동(A+B)삽입일개pGEFP-C1재체중,득도3개중조재체,능구분별혹동시표체침대A혹(화)B서렬적siRNA,분별전염계막세포후,통과ELISA화RT-PCR동태관찰계막세포TGF-β1、FN적mRNA화세포배양상청중단백농도적변화,탐토이자변화적상호관계.결과 재체표체적siRNA여TGF-β1기인제538-556서렬상동자,능구현저간우48 h시간단TGF-β1 mRNA(RT-PCR)(P＜0.01)화단백분비(세포상청ELISA)(P＜0.01),지질체전염자격계막세포FN분비현저증가,표현위대조조화TGF-β1미피유효간우조,FN분비우24 h시단체도봉치,이TGF-β1피간우적실험조,FN봉치피추지도48 h재출현(P＜0.01).결론 siRNA간우계막세포TGF-β1적표체,능구감소FN적표체,단FN적표체가능병불완전의뢰우TGF-β1.
