分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2011年
1期
17-24
,共8页
陈松%张洁夫%浦惠明%申爱娟%周小婴%龙卫华%胡茂龙%戚存扣
陳鬆%張潔伕%浦惠明%申愛娟%週小嬰%龍衛華%鬍茂龍%慼存釦
진송%장길부%포혜명%신애연%주소영%룡위화%호무룡%척존구
转基因高油酸油菜%基因拷贝数%整合位点
轉基因高油痠油菜%基因拷貝數%整閤位點
전기인고유산유채%기인고패수%정합위점
为获得转基因高油酸油菜T-DNA插入拷贝数及整合位点相关信息,本研究应用地高辛标记的NPTII基因片段为探针,与经BamHI酶切的转基因甘蓝型油菜高油酸株系W-4的T2代单株的基因组DNA进行Southern杂交.结果显示:W-4的T2代单株的基因组含有一个T-DNA拷贝.用3到4个根据载体pCNFlRnos序列设计的嵌套特异性引物分别与简并引物组合进行TAIL-PCR反应,扩增得到转基因油菜T-DNA插入位点的左、右边界旁侧序列.经分析右边界旁侧序列长度为470bp,其中180bp为载体序列,290bp为W-4的基因组序列;左边界旁侧序列长度为641 bp,其中365 bp为W-4的基因组序列,276 bp为载体序列.序列比对结果发现该转基因事件中,T-DNA左边界序列完全整合到油菜基因组中,仅有1个碱基由G转换成了A.而右边界则缺失了包括RB border在内的62个碱基.结果表明:转基因高油酸油菜T-DNA的整合是一次无其他额外载体序列的整合.blast分析获得的与左右边界相连的油菜基因组序列,未检索到与之高度同源的序列,推测T-DNA插入位点可能位于油菜基因组非编码区.综上所述,本研究分析了转基因油菜W-4基因中T-DNA拷贝数、整合特点和旁侧序列,研究结果为转基因油菜的生物安全性评价以及转基因高油酸油菜的检测提供重要的基础信息.
為穫得轉基因高油痠油菜T-DNA插入拷貝數及整閤位點相關信息,本研究應用地高辛標記的NPTII基因片段為探針,與經BamHI酶切的轉基因甘藍型油菜高油痠株繫W-4的T2代單株的基因組DNA進行Southern雜交.結果顯示:W-4的T2代單株的基因組含有一箇T-DNA拷貝.用3到4箇根據載體pCNFlRnos序列設計的嵌套特異性引物分彆與簡併引物組閤進行TAIL-PCR反應,擴增得到轉基因油菜T-DNA插入位點的左、右邊界徬側序列.經分析右邊界徬側序列長度為470bp,其中180bp為載體序列,290bp為W-4的基因組序列;左邊界徬側序列長度為641 bp,其中365 bp為W-4的基因組序列,276 bp為載體序列.序列比對結果髮現該轉基因事件中,T-DNA左邊界序列完全整閤到油菜基因組中,僅有1箇堿基由G轉換成瞭A.而右邊界則缺失瞭包括RB border在內的62箇堿基.結果錶明:轉基因高油痠油菜T-DNA的整閤是一次無其他額外載體序列的整閤.blast分析穫得的與左右邊界相連的油菜基因組序列,未檢索到與之高度同源的序列,推測T-DNA插入位點可能位于油菜基因組非編碼區.綜上所述,本研究分析瞭轉基因油菜W-4基因中T-DNA拷貝數、整閤特點和徬側序列,研究結果為轉基因油菜的生物安全性評價以及轉基因高油痠油菜的檢測提供重要的基礎信息.
위획득전기인고유산유채T-DNA삽입고패수급정합위점상관신식,본연구응용지고신표기적NPTII기인편단위탐침,여경BamHI매절적전기인감람형유채고유산주계W-4적T2대단주적기인조DNA진행Southern잡교.결과현시:W-4적T2대단주적기인조함유일개T-DNA고패.용3도4개근거재체pCNFlRnos서렬설계적감투특이성인물분별여간병인물조합진행TAIL-PCR반응,확증득도전기인유채T-DNA삽입위점적좌、우변계방측서렬.경분석우변계방측서렬장도위470bp,기중180bp위재체서렬,290bp위W-4적기인조서렬;좌변계방측서렬장도위641 bp,기중365 bp위W-4적기인조서렬,276 bp위재체서렬.서렬비대결과발현해전기인사건중,T-DNA좌변계서렬완전정합도유채기인조중,부유1개감기유G전환성료A.이우변계칙결실료포괄RB border재내적62개감기.결과표명:전기인고유산유채T-DNA적정합시일차무기타액외재체서렬적정합.blast분석획득적여좌우변계상련적유채기인조서렬,미검색도여지고도동원적서렬,추측T-DNA삽입위점가능위우유채기인조비편마구.종상소술,본연구분석료전기인유채W-4기인중T-DNA고패수、정합특점화방측서렬,연구결과위전기인유채적생물안전성평개이급전기인고유산유채적검측제공중요적기출신식.
