分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2010年
4期
800-803
,共4页
杨帆%李发根%翁启杰%李梅%洪亚辉%甘四明
楊帆%李髮根%翁啟傑%李梅%洪亞輝%甘四明
양범%리발근%옹계걸%리매%홍아휘%감사명
单叶省藤%RNA提取%cDNA文库
單葉省籐%RNA提取%cDNA文庫
단협성등%RNA제취%cDNA문고
本实验比较了3种RNA提取方法提取单叶省藤的茎、雄花序和根的结果,改良CTAB法和Trizol法提取的RNA无明显降解、完整性好,均可用于cDNA文库构建,而异硫氰酸胍法提取的RNA降解严重;考虑到改良CTAB法成本较低,故推荐为首选方法.将茎、雄花序和根三种组织的RNA等量混合后,利用SMART策略构建了全长cDNA文库;通过涂平板培养后的菌落计数,测得初库滴度为2.91×105 cfu/μL;从培养平板上随机挑取16个菌落进行PCR检测,文库重组率为87.5%,插入片段平均长度为1.5 kb左右.所建文库的质量可靠,为下一步的EST测序和候选基因发现提供了材料基础.
本實驗比較瞭3種RNA提取方法提取單葉省籐的莖、雄花序和根的結果,改良CTAB法和Trizol法提取的RNA無明顯降解、完整性好,均可用于cDNA文庫構建,而異硫氰痠胍法提取的RNA降解嚴重;攷慮到改良CTAB法成本較低,故推薦為首選方法.將莖、雄花序和根三種組織的RNA等量混閤後,利用SMART策略構建瞭全長cDNA文庫;通過塗平闆培養後的菌落計數,測得初庫滴度為2.91×105 cfu/μL;從培養平闆上隨機挑取16箇菌落進行PCR檢測,文庫重組率為87.5%,插入片段平均長度為1.5 kb左右.所建文庫的質量可靠,為下一步的EST測序和候選基因髮現提供瞭材料基礎.
본실험비교료3충RNA제취방법제취단협성등적경、웅화서화근적결과,개량CTAB법화Trizol법제취적RNA무명현강해、완정성호,균가용우cDNA문고구건,이이류청산고법제취적RNA강해엄중;고필도개량CTAB법성본교저,고추천위수선방법.장경、웅화서화근삼충조직적RNA등량혼합후,이용SMART책략구건료전장cDNA문고;통과도평판배양후적균락계수,측득초고적도위2.91×105 cfu/μL;종배양평판상수궤도취16개균락진행PCR검측,문고중조솔위87.5%,삽입편단평균장도위1.5 kb좌우.소건문고적질량가고,위하일보적EST측서화후선기인발현제공료재료기출.
