中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2009年
1期
5-9
,共5页
朱孝荣%朱园园%高秀先%袁红花%孙怀昌%高殿帅
硃孝榮%硃園園%高秀先%袁紅花%孫懷昌%高殿帥
주효영%주완완%고수선%원홍화%손부창%고전수
小鼠%酪氨酸羟化酶启动子%调控%表达
小鼠%酪氨痠羥化酶啟動子%調控%錶達
소서%락안산간화매계동자%조공%표체
目的 对小鼠酪氨酸羟化酶 (tyrosine hydroxylase,TH) 启动子进行序列分析,研究启动子不同区域对下游基因表达调控能力.方法 高保真PCR分别扩增出450、1500、2000、2400、3400 bp TH启动子片段置换pcDNA3中CMV启动子,并在多克隆位点插入EGFP报告基因,重组后质粒分别瞬时转染MN-9D细胞 (TH+) 和ECV细胞 (TH-),流式细胞仪观察EGFP基因在细胞内表达情况.结果 转染后MN-9D细胞中EGFP阳性率分别为8.01%、7.97%、7.85%、7.72%、7.74%,差异无显著性.转染ECV细胞 (TH-)中,EGFP阳性率分别为6.51%、6.35%、6.71%、0.89%、1.02%.3400bp、2400 bp启动子片段在TH-细胞中调控能力受到明显抑制.结论 上述启动子片段均有调控基因表达能力,初步证明TH启动子中特异性调控区域在2400～2000 bp范围内.
目的 對小鼠酪氨痠羥化酶 (tyrosine hydroxylase,TH) 啟動子進行序列分析,研究啟動子不同區域對下遊基因錶達調控能力.方法 高保真PCR分彆擴增齣450、1500、2000、2400、3400 bp TH啟動子片段置換pcDNA3中CMV啟動子,併在多剋隆位點插入EGFP報告基因,重組後質粒分彆瞬時轉染MN-9D細胞 (TH+) 和ECV細胞 (TH-),流式細胞儀觀察EGFP基因在細胞內錶達情況.結果 轉染後MN-9D細胞中EGFP暘性率分彆為8.01%、7.97%、7.85%、7.72%、7.74%,差異無顯著性.轉染ECV細胞 (TH-)中,EGFP暘性率分彆為6.51%、6.35%、6.71%、0.89%、1.02%.3400bp、2400 bp啟動子片段在TH-細胞中調控能力受到明顯抑製.結論 上述啟動子片段均有調控基因錶達能力,初步證明TH啟動子中特異性調控區域在2400～2000 bp範圍內.
목적 대소서락안산간화매 (tyrosine hydroxylase,TH) 계동자진행서렬분석,연구계동자불동구역대하유기인표체조공능력.방법 고보진PCR분별확증출450、1500、2000、2400、3400 bp TH계동자편단치환pcDNA3중CMV계동자,병재다극륭위점삽입EGFP보고기인,중조후질립분별순시전염MN-9D세포 (TH+) 화ECV세포 (TH-),류식세포의관찰EGFP기인재세포내표체정황.결과 전염후MN-9D세포중EGFP양성솔분별위8.01%、7.97%、7.85%、7.72%、7.74%,차이무현저성.전염ECV세포 (TH-)중,EGFP양성솔분별위6.51%、6.35%、6.71%、0.89%、1.02%.3400bp、2400 bp계동자편단재TH-세포중조공능력수도명현억제.결론 상술계동자편단균유조공기인표체능력,초보증명TH계동자중특이성조공구역재2400～2000 bp범위내.
