复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2008年
6期
811-814
,共4页
王羽雄%于敏%顾银良%宋后燕
王羽雄%于敏%顧銀良%宋後燕
왕우웅%우민%고은량%송후연
组织因子%外源性凝血%毕赤酵母%凝血酶原时间
組織因子%外源性凝血%畢赤酵母%凝血酶原時間
조직인자%외원성응혈%필적효모%응혈매원시간
目的 制备具有凝血活性的重组人组织因子(recombinant tissue factor,r-TF)用于构建PT试剂盒.方法 将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastoris GS115,转化子经G418抗性筛选后,获得高表达克隆.工程菌在摇瓶中经甲醇诱导,表达r-TF,表达产物经纯化后,鉴定生物活性.结果 SDS-PAGE证实表达产物的分子量为37 000～45 000,Western blot证明其为人组织因子衍生物,纯化后,r-TF经脂化后,具有促凝血活性,为研制凝血活酶时间测定试剂盒及研究TF的构效关系创造条件.结论 用毕赤酵母高效表达具有活性的rTF,表达量达到182 mg/L.纯化工艺简便易行,蛋白回收率高,纯化后的rTF可用于组装PT测定试剂盒.
目的 製備具有凝血活性的重組人組織因子(recombinant tissue factor,r-TF)用于構建PT試劑盒.方法 將人組織因子胞外區編碼基因與酵母錶達載體重組,構建酵母錶達質粒pPIC9K-TF,利用電穿孔法轉化宿主菌Pichia pastoris GS115,轉化子經G418抗性篩選後,穫得高錶達剋隆.工程菌在搖瓶中經甲醇誘導,錶達r-TF,錶達產物經純化後,鑒定生物活性.結果 SDS-PAGE證實錶達產物的分子量為37 000～45 000,Western blot證明其為人組織因子衍生物,純化後,r-TF經脂化後,具有促凝血活性,為研製凝血活酶時間測定試劑盒及研究TF的構效關繫創造條件.結論 用畢赤酵母高效錶達具有活性的rTF,錶達量達到182 mg/L.純化工藝簡便易行,蛋白迴收率高,純化後的rTF可用于組裝PT測定試劑盒.
목적 제비구유응혈활성적중조인조직인자(recombinant tissue factor,r-TF)용우구건PT시제합.방법 장인조직인자포외구편마기인여효모표체재체중조,구건효모표체질립pPIC9K-TF,이용전천공법전화숙주균Pichia pastoris GS115,전화자경G418항성사선후,획득고표체극륭.공정균재요병중경갑순유도,표체r-TF,표체산물경순화후,감정생물활성.결과 SDS-PAGE증실표체산물적분자량위37 000～45 000,Western blot증명기위인조직인자연생물,순화후,r-TF경지화후,구유촉응혈활성,위연제응혈활매시간측정시제합급연구TF적구효관계창조조건.결론 용필적효모고효표체구유활성적rTF,표체량체도182 mg/L.순화공예간편역행,단백회수솔고,순화후적rTF가용우조장PT측정시제합.
