生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
10期
1740-1746
,共7页
巨大芽孢杆菌%β-淀粉酶%基因克隆和表达%酶学性质
巨大芽孢桿菌%β-澱粉酶%基因剋隆和錶達%酶學性質
거대아포간균%β-정분매%기인극륭화표체%매학성질
从巨大芽孢杆(Bacillus megaterium)的全基因组DNA文库中筛选出一个β-淀粉酶基因amyG,分析测定了其核苷酸序列并进行了诱导表达;其中amyG编码的蛋白有545个氨基酸、分子量为60.194 kD,与已报道的巨大芽孢杆菌DSM319的β-淀粉酶序列有着94.5%的同源性.经氨基酸序列比较分析发现,AmyG从N末端到C末端依次由信号肽域、糖基水解酶催化功能域和淀粉结合域3个功能域组成.其中催化功能域里含有第14家族糖基水解酶常见的几个高度保守的酶催化活性区.经多步纯化,重组酶的比活共提高了7.4倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品;经SDS-PAGE电泳测定,酶AmyG的分子量为57 kD.该酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为7.0;在温度不超过60℃时,酶活较稳定:AmyG能迅速降解淀粉生成麦芽糖,属于外切β-糖苷酶.
從巨大芽孢桿(Bacillus megaterium)的全基因組DNA文庫中篩選齣一箇β-澱粉酶基因amyG,分析測定瞭其覈苷痠序列併進行瞭誘導錶達;其中amyG編碼的蛋白有545箇氨基痠、分子量為60.194 kD,與已報道的巨大芽孢桿菌DSM319的β-澱粉酶序列有著94.5%的同源性.經氨基痠序列比較分析髮現,AmyG從N末耑到C末耑依次由信號肽域、糖基水解酶催化功能域和澱粉結閤域3箇功能域組成.其中催化功能域裏含有第14傢族糖基水解酶常見的幾箇高度保守的酶催化活性區.經多步純化,重組酶的比活共提高瞭7.4倍,穫得凝膠電泳均一的蛋白樣品;經SDS-PAGE電泳測定,酶AmyG的分子量為57 kD.該酶的最適反應溫度為60℃,最適反應pH為7.0;在溫度不超過60℃時,酶活較穩定:AmyG能迅速降解澱粉生成麥芽糖,屬于外切β-糖苷酶.
종거대아포간(Bacillus megaterium)적전기인조DNA문고중사선출일개β-정분매기인amyG,분석측정료기핵감산서렬병진행료유도표체;기중amyG편마적단백유545개안기산、분자량위60.194 kD,여이보도적거대아포간균DSM319적β-정분매서렬유착94.5%적동원성.경안기산서렬비교분석발현,AmyG종N말단도C말단의차유신호태역、당기수해매최화공능역화정분결합역3개공능역조성.기중최화공능역리함유제14가족당기수해매상견적궤개고도보수적매최화활성구.경다보순화,중조매적비활공제고료7.4배,획득응효전영균일적단백양품;경SDS-PAGE전영측정,매AmyG적분자량위57 kD.해매적최괄반응온도위60℃,최괄반응pH위7.0;재온도불초과60℃시,매활교은정:AmyG능신속강해정분생성맥아당,속우외절β-당감매.
