CAJ | 학술논문

[目的] 优化小麦染色体流式分选及特定染色体BAC文库构建技术体系,为加速小麦基因组学研究提供技术支撑.[方法] 采用双阻断法对中国春 5DL 端体根尖分生组织进行细胞周期同步化处理,结合机械匀浆法制备染色体悬浮液进行流式核型分析,分选染色体5DL及PCR检测,对小麦染色体分选技术体系进行优化.对复合峰分选产物Bam HI酶切制备高分子量(high molecular weight,HMW)DNA,按10:1质量比与双元细菌人工染色体(binary-bacterial artificial chromosome,BIBAC)连接,电激转化感受态细胞DH10B,随机挑取100个重组子,经NotI完全酶切后脉冲电泳检测插入片段大小,优化小麦染色体BAC文库构建的技术体系.[结果] 经1.25 mmol-L-1羟基脲(hydroxyurea,HU)18 h,恢复6 h和1μ mol.L-1氟乐灵(trifluralin)2.5 h的顺序处理的小麦根尖分生组织,细胞有丝分裂指数可超过60%.流式核型分析表明,5DL 端体的流式核型图由清晰的三个复合峰和两个单峰组成.PCR鉴定表明,其中一单峰确由5DL染色体组成,部分酶切复合峰染色体3～10 min,可以获得50～300 kb的HMW DNA.连接产物检测显示平均插入片段可达100 kb左右,根据荧光通道值,估算5DL端体的大小约为482 Mb,构建库容为19 000个克隆的5DL端体特异文库即可达到约4倍的覆盖率.[结论] 上述两项优化技术适用于小麦染色体的分选及染色体特异文库的构建.
[목적] 우화소맥염색체류식분선급특정염색체BAC문고구건기술체계,위가속소맥기인조학연구제공기술지탱.[방법] 채용쌍조단법대중국춘 5DL 단체근첨분생조직진행세포주기동보화처리,결합궤계균장법제비염색체현부액진행류식핵형분석,분선염색체5DL급PCR검측,대소맥염색체분선기술체계진행우화.대복합봉분선산물Bam HI매절제비고분자량(high molecular weight,HMW)DNA,안10:1질량비여쌍원세균인공염색체(binary-bacterial artificial chromosome,BIBAC)련접,전격전화감수태세포DH10B,수궤도취100개중조자,경NotI완전매절후맥충전영검측삽입편단대소,우화소맥염색체BAC문고구건적기술체계.[결과] 경1.25 mmol-L-1간기뇨(hydroxyurea,HU)18 h,회복6 h화1μ mol.L-1불악령(trifluralin)2.5 h적순서처리적소맥근첨분생조직,세포유사분렬지수가초과60%.류식핵형분석표명,5DL 단체적류식핵형도유청석적삼개복합봉화량개단봉조성.PCR감정표명,기중일단봉학유5DL염색체조성,부분매절복합봉염색체3～10 min,가이획득50～300 kb적HMW DNA.련접산물검측현시평균삽입편단가체100 kb좌우,근거형광통도치,고산5DL단체적대소약위482 Mb,구건고용위19 000개극륭적5DL단체특이문고즉가체도약4배적복개솔.[결론] 상술량항우화기술괄용우소맥염색체적분선급염색체특이문고적구건.