CAJ | 학술논문

目的:探讨从小鼠H22肝癌细胞中提纯的热休克蛋白gp96(HSPgp96)对小鼠腹腔巨噬细胞(PEM(ψ))呼吸爆发的影响及其与细胞内外游离钙的关系.方法:(1)用亲和层析和离子交换层析等方法从小鼠H22肝癌细胞中获得纯化的HSPgp96.(2)用细胞内过氧化物荧光探针H2DCF-DA监测HSPgp96作用于小鼠PEM(ψ)过程中,单个细胞活性氧(ROS)信号的变化,反映PEM(ψ)内呼吸爆发时的变化过程;用荧光探针Fluo-3/AM监测HSPgp96作用于小鼠PEM(ψ)过程中,单个细胞内钙离子([Ca2+]i)信号的变化.(3)使用细胞膜和细胞内钙通道抑制剂及钙离子载体后,再观察HSPgp96作用后ROS信号的变化.结果:(1)加入HSPgp96后PEM(ψ)内Fluo-3荧光强度立即上升,70s时增幅达161.05%±50.99%;当分别阻断细胞外钙内流、抑制细胞内钙库释放功能后110s增幅分别为84.81%±29.52%和46.21%±17.24%.同时阻断胞内外钙作用,HSPgp96这一诱发功能明显被抑制.加入钙离子载体后可见细胞内荧光强度迅速增强,于110 s时达156.98%+45.83%,随后迅速下降.(2)小鼠PEM(ψ)受HSPgp96刺激后表征ROS的荧光强度立即上升,620 s达基础荧光值的636.78%±82.02%,随后始终维持在高水平.当分别阻断细胞外钙内流、抑制细胞内钙库释放功能后,再加入HSPgp96后细胞内ROS荧光值上升幅度较小.同时阻断了胞内外钙作用后,HSPgp96刺激后ROS荧光值上升没有明显高峰出现.结论:HSPgp96作用于小鼠PEM(ψ)后,促进了细胞外钙内流并使细胞内钙库释钙,这是HSPgp96诱发细胞内活性氧增加的基本机制.
목적:탐토종소서H22간암세포중제순적열휴극단백gp96(HSPgp96)대소서복강거서세포(PEM(ψ))호흡폭발적영향급기여세포내외유리개적관계.방법:(1)용친화층석화리자교환층석등방법종소서H22간암세포중획득순화적HSPgp96.(2)용세포내과양화물형광탐침H2DCF-DA감측HSPgp96작용우소서PEM(ψ)과정중,단개세포활성양(ROS)신호적변화,반영PEM(ψ)내호흡폭발시적변화과정;용형광탐침Fluo-3/AM감측HSPgp96작용우소서PEM(ψ)과정중,단개세포내개리자([Ca2+]i)신호적변화.(3)사용세포막화세포내개통도억제제급개리자재체후,재관찰HSPgp96작용후ROS신호적변화.결과:(1)가입HSPgp96후PEM(ψ)내Fluo-3형광강도립즉상승,70s시증폭체161.05%±50.99%;당분별조단세포외개내류、억제세포내개고석방공능후110s증폭분별위84.81%±29.52%화46.21%±17.24%.동시조단포내외개작용,HSPgp96저일유발공능명현피억제.가입개리자재체후가견세포내형광강도신속증강,우110 s시체156.98%+45.83%,수후신속하강.(2)소서PEM(ψ)수HSPgp96자격후표정ROS적형광강도립즉상승,620 s체기출형광치적636.78%±82.02%,수후시종유지재고수평.당분별조단세포외개내류、억제세포내개고석방공능후,재가입HSPgp96후세포내ROS형광치상승폭도교소.동시조단료포내외개작용후,HSPgp96자격후ROS형광치상승몰유명현고봉출현.결론:HSPgp96작용우소서PEM(ψ)후,촉진료세포외개내류병사세포내개고석개,저시HSPgp96유발세포내활성양증가적기본궤제.