实用心脑肺血管病杂志
實用心腦肺血管病雜誌
실용심뇌폐혈관병잡지
PRACTICAL JOURNAL OF CARDIAC CEREBRAL PNEUMAL AND VASCULAR DISEASE
2007年
11期
809-815
,共7页
陈永倖%蔡俊宏%黄白丽%金普乐%黄奕江
陳永倖%蔡俊宏%黃白麗%金普樂%黃奕江
진영행%채준굉%황백려%금보악%황혁강
支气管哮喘%细胞凋亡%Bcl-2基因%荧光定量RT-PCR%酶联免疫吸附法
支氣管哮喘%細胞凋亡%Bcl-2基因%熒光定量RT-PCR%酶聯免疫吸附法
지기관효천%세포조망%Bcl-2기인%형광정량RT-PCR%매련면역흡부법
目的 支气管哮喘的发病机制非常复杂,至今尚未完全阐明.目前认为细胞凋亡与支气管哮喘发病相关.Bcl-2基因是近年来广泛重视的一种凋亡抑制基因,可抑制多种细胞凋亡,与多种疾病的发生存在密切的关系.本研究测定支气管哮喘患者外周血白细胞Bcl-2基因mRNA的表达量及其血清中蛋白的含量,研究Bcl-2在支气管哮喘中的表达及其相互关系,初步探讨Bcl-2基因在支气管哮喘的发生、发展中的生物学意义. 方法 20例支气管哮喘中重度发作患者为实验组,20例无支气管哮喘、变态反应性疾病的健康人为对照组.采取抗凝静脉血标本5ml,立即用Dextron-PBS分离出血白细胞,采用TristarTM试剂按试剂盒说明提取总RNA,-80°超低温冰箱保存,采用TaKaRa试剂盒检测Bcl-2基因mRNA表达量.两步法:第一步:用ExScriptTM反转录酶,对Bcl-2mRNA反转录成cDNA;第二步:用Premix Ex TaqTM酶对反转录后的cDNA进行扩增,10倍梯度稀释cDNA模板,分别为100、10-1、10-2、10-3、10-4倍梯度.用美国PE公司5700型实时荧光定量PCR仪进行检测,以GAPDH基因为对照基因,用仪器附带SDS软件自动算出Bcl-2基因与对照基因比值,确定Bcl-2基因的相对含量.同时抽取抗凝静脉血2ml,伊红染色,行外周血嗜酸性粒细胞计数.抽取不抗凝静脉血2ml,分离血清,采用澳大利亚Bender Medsystems公司人Bcl-2蛋白检测试剂盒,按试剂盒说明操作,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测Bcl-2蛋白含量.应用SAS 6.12计算机软件对实验结果进行统计学分析. 结果 支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞计数较正常对照组比较有非常显著性增加(P＜0.01),20例支气管哮喘患者外周血细胞Bcl-2基因mRNA表达量高于正常对照组,两组有非常显著性差异(P＜0.01),外周血清Bcl-2蛋白含量与正常对照组差异无显著性(P＞0.05). 结论 本研究证实支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞显著增多.支气管哮喘患者外周血细胞Bcl-2基因mRNA表达显著增多,揭示Bcl-2基因在支气管哮喘发病中具有一定的作用和意义,Bcl-2基因与支气管哮喘密切相关.而外周血清中Bcl-2蛋白含量与支气管哮喘的发病无直接相关.
目的 支氣管哮喘的髮病機製非常複雜,至今尚未完全闡明.目前認為細胞凋亡與支氣管哮喘髮病相關.Bcl-2基因是近年來廣汎重視的一種凋亡抑製基因,可抑製多種細胞凋亡,與多種疾病的髮生存在密切的關繫.本研究測定支氣管哮喘患者外週血白細胞Bcl-2基因mRNA的錶達量及其血清中蛋白的含量,研究Bcl-2在支氣管哮喘中的錶達及其相互關繫,初步探討Bcl-2基因在支氣管哮喘的髮生、髮展中的生物學意義. 方法 20例支氣管哮喘中重度髮作患者為實驗組,20例無支氣管哮喘、變態反應性疾病的健康人為對照組.採取抗凝靜脈血標本5ml,立即用Dextron-PBS分離齣血白細胞,採用TristarTM試劑按試劑盒說明提取總RNA,-80°超低溫冰箱保存,採用TaKaRa試劑盒檢測Bcl-2基因mRNA錶達量.兩步法:第一步:用ExScriptTM反轉錄酶,對Bcl-2mRNA反轉錄成cDNA;第二步:用Premix Ex TaqTM酶對反轉錄後的cDNA進行擴增,10倍梯度稀釋cDNA模闆,分彆為100、10-1、10-2、10-3、10-4倍梯度.用美國PE公司5700型實時熒光定量PCR儀進行檢測,以GAPDH基因為對照基因,用儀器附帶SDS軟件自動算齣Bcl-2基因與對照基因比值,確定Bcl-2基因的相對含量.同時抽取抗凝靜脈血2ml,伊紅染色,行外週血嗜痠性粒細胞計數.抽取不抗凝靜脈血2ml,分離血清,採用澳大利亞Bender Medsystems公司人Bcl-2蛋白檢測試劑盒,按試劑盒說明操作,通過酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測Bcl-2蛋白含量.應用SAS 6.12計算機軟件對實驗結果進行統計學分析. 結果 支氣管哮喘患者外週血嗜痠性粒細胞計數較正常對照組比較有非常顯著性增加(P＜0.01),20例支氣管哮喘患者外週血細胞Bcl-2基因mRNA錶達量高于正常對照組,兩組有非常顯著性差異(P＜0.01),外週血清Bcl-2蛋白含量與正常對照組差異無顯著性(P＞0.05). 結論 本研究證實支氣管哮喘患者外週血嗜痠性粒細胞顯著增多.支氣管哮喘患者外週血細胞Bcl-2基因mRNA錶達顯著增多,揭示Bcl-2基因在支氣管哮喘髮病中具有一定的作用和意義,Bcl-2基因與支氣管哮喘密切相關.而外週血清中Bcl-2蛋白含量與支氣管哮喘的髮病無直接相關.
목적 지기관효천적발병궤제비상복잡,지금상미완전천명.목전인위세포조망여지기관효천발병상관.Bcl-2기인시근년래엄범중시적일충조망억제기인,가억제다충세포조망,여다충질병적발생존재밀절적관계.본연구측정지기관효천환자외주혈백세포Bcl-2기인mRNA적표체량급기혈청중단백적함량,연구Bcl-2재지기관효천중적표체급기상호관계,초보탐토Bcl-2기인재지기관효천적발생、발전중적생물학의의. 방법 20례지기관효천중중도발작환자위실험조,20례무지기관효천、변태반응성질병적건강인위대조조.채취항응정맥혈표본5ml,립즉용Dextron-PBS분리출혈백세포,채용TristarTM시제안시제합설명제취총RNA,-80°초저온빙상보존,채용TaKaRa시제합검측Bcl-2기인mRNA표체량.량보법:제일보:용ExScriptTM반전록매,대Bcl-2mRNA반전록성cDNA;제이보:용Premix Ex TaqTM매대반전록후적cDNA진행확증,10배제도희석cDNA모판,분별위100、10-1、10-2、10-3、10-4배제도.용미국PE공사5700형실시형광정량PCR의진행검측,이GAPDH기인위대조기인,용의기부대SDS연건자동산출Bcl-2기인여대조기인비치,학정Bcl-2기인적상대함량.동시추취항응정맥혈2ml,이홍염색,행외주혈기산성립세포계수.추취불항응정맥혈2ml,분리혈청,채용오대리아Bender Medsystems공사인Bcl-2단백검측시제합,안시제합설명조작,통과매련면역흡부법(ELISA)검측Bcl-2단백함량.응용SAS 6.12계산궤연건대실험결과진행통계학분석. 결과 지기관효천환자외주혈기산성립세포계수교정상대조조비교유비상현저성증가(P＜0.01),20례지기관효천환자외주혈세포Bcl-2기인mRNA표체량고우정상대조조,량조유비상현저성차이(P＜0.01),외주혈청Bcl-2단백함량여정상대조조차이무현저성(P＞0.05). 결론 본연구증실지기관효천환자외주혈기산성립세포현저증다.지기관효천환자외주혈세포Bcl-2기인mRNA표체현저증다,게시Bcl-2기인재지기관효천발병중구유일정적작용화의의,Bcl-2기인여지기관효천밀절상관.이외주혈청중Bcl-2단백함량여지기관효천적발병무직접상관.
