中国农业科学
中國農業科學
중국농업과학
SCIENTIA AGRICULTURA SINICA
2007年
11期
2593-2599
,共7页
汪洋%杨桂香%吴波浪%张万江%黄伟华%彭险峰
汪洋%楊桂香%吳波浪%張萬江%黃偉華%彭險峰
왕양%양계향%오파랑%장만강%황위화%팽험봉
猪表皮生长因子%毕赤酵母%分泌表达%生物活性
豬錶皮生長因子%畢赤酵母%分泌錶達%生物活性
저표피생장인자%필적효모%분비표체%생물활성
[目的]猪表皮生长因子(pEGF)具有刺激静止期猪卵母细胞的成熟以及刺激仔猪胃肠上皮细胞成熟的功能,从而可以提高母猪繁殖率和降低断奶仔猪的应激.因此开发猪表皮生长因子具有重要意义.[方法]用人工合成的pEGF 基因为模板,用PCR扩增获得pEGF-6His片段,将其克隆到载体pPIC9构建重组质粒pPIC9-pEGF并电转化毕赤酵母.用斑点杂交法筛选多拷贝整合转化子即基因工程菌,用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,纯化产物用抗His-tag 的单克隆抗体进行蛋白质免疫印迹、氨基端测序鉴定、体外生物活性检测.[结果]斑点杂交法筛选中信号越强的转化子,甲醇诱导表达的目的蛋白含量越高.免疫印迹中可以观察到印迹条带.氨基端氨基酸测序发现纯化的表达产物含有2条肽链,其N-端15个氨基酸的序列分别与天然的pEGF以及Glu-Ala -pEGF的序列相同.体外生物活性检测结果表明,纯化的表达产物对BALB/c 3T3细胞具有显著的增殖作用.[结论]本研究获得了能高效表达具有生物学活性的重组猪表皮生长因子的基因工程菌.
[目的]豬錶皮生長因子(pEGF)具有刺激靜止期豬卵母細胞的成熟以及刺激仔豬胃腸上皮細胞成熟的功能,從而可以提高母豬繁殖率和降低斷奶仔豬的應激.因此開髮豬錶皮生長因子具有重要意義.[方法]用人工閤成的pEGF 基因為模闆,用PCR擴增穫得pEGF-6His片段,將其剋隆到載體pPIC9構建重組質粒pPIC9-pEGF併電轉化畢赤酵母.用斑點雜交法篩選多拷貝整閤轉化子即基因工程菌,用Ni-NTA親和層析法純化目的蛋白,純化產物用抗His-tag 的單剋隆抗體進行蛋白質免疫印跡、氨基耑測序鑒定、體外生物活性檢測.[結果]斑點雜交法篩選中信號越彊的轉化子,甲醇誘導錶達的目的蛋白含量越高.免疫印跡中可以觀察到印跡條帶.氨基耑氨基痠測序髮現純化的錶達產物含有2條肽鏈,其N-耑15箇氨基痠的序列分彆與天然的pEGF以及Glu-Ala -pEGF的序列相同.體外生物活性檢測結果錶明,純化的錶達產物對BALB/c 3T3細胞具有顯著的增殖作用.[結論]本研究穫得瞭能高效錶達具有生物學活性的重組豬錶皮生長因子的基因工程菌.
[목적]저표피생장인자(pEGF)구유자격정지기저란모세포적성숙이급자격자저위장상피세포성숙적공능,종이가이제고모저번식솔화강저단내자저적응격.인차개발저표피생장인자구유중요의의.[방법]용인공합성적pEGF 기인위모판,용PCR확증획득pEGF-6His편단,장기극륭도재체pPIC9구건중조질립pPIC9-pEGF병전전화필적효모.용반점잡교법사선다고패정합전화자즉기인공정균,용Ni-NTA친화층석법순화목적단백,순화산물용항His-tag 적단극륭항체진행단백질면역인적、안기단측서감정、체외생물활성검측.[결과]반점잡교법사선중신호월강적전화자,갑순유도표체적목적단백함량월고.면역인적중가이관찰도인적조대.안기단안기산측서발현순화적표체산물함유2조태련,기N-단15개안기산적서렬분별여천연적pEGF이급Glu-Ala -pEGF적서렬상동.체외생물활성검측결과표명,순화적표체산물대BALB/c 3T3세포구유현저적증식작용.[결론]본연구획득료능고효표체구유생물학활성적중조저표피생장인자적기인공정균.
