免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2007年
6期
619-621,626
,共4页
许小朋%王锁英%杨敏%邱谷风%王胜军%邵启祥%许化溪
許小朋%王鎖英%楊敏%邱穀風%王勝軍%邵啟祥%許化溪
허소붕%왕쇄영%양민%구곡풍%왕성군%소계상%허화계
基因转染%T-bet%干扰素γ%U937
基因轉染%T-bet%榦擾素γ%U937
기인전염%T-bet%간우소γ%U937
目的 探讨人T-bet基因在白血病细胞株U937中的表达及其对IFN-γ分泌的影响,寻求通过免疫调节改善白血病患者机体免疫状态的可能性.方法 采用电穿孔技术将重组人pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)质粒转染U937细胞,RT-PCR检测转染前后U937细胞T-bet的mRNA水平;westen-blot检测表达的T-bet蛋白;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平.试验中同时设立pIRES-eGFP质粒为对照.结果 电穿孔转染U937细胞后,在荧光显微镜下观察到带荧光的细胞(转染细胞),其荧光细胞阳性率80%左右,提示转染成功;转染T-bet的U937细胞,分别经RT-PCR及westen-blot检测到T-bet的mRNA和表达的蛋白,而未经转染或转染对照质粒pIRES-eGFP的细胞,均未见目的基因的转录和蛋白表达;T-bet转染细胞的培养上清中含有较高水平的IFN-γ,而转染前及对照质粒转染的细胞IFN-γ的分泌水平极低.结论 通过电穿孔方法 成功将人T-bet基因转染到白血病细胞株U937中,并检测到大量IFN-γ的产生.T-bet是免疫应答调节的重要转录因子,对其研究将有助于进一步探讨T-bet基因或其表达产物作为Th1应答的调节剂用于临床血液病治疗的可能性.
目的 探討人T-bet基因在白血病細胞株U937中的錶達及其對IFN-γ分泌的影響,尋求通過免疫調節改善白血病患者機體免疫狀態的可能性.方法 採用電穿孔技術將重組人pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)質粒轉染U937細胞,RT-PCR檢測轉染前後U937細胞T-bet的mRNA水平;westen-blot檢測錶達的T-bet蛋白;ELISA檢測其分泌IFN-γ的水平.試驗中同時設立pIRES-eGFP質粒為對照.結果 電穿孔轉染U937細胞後,在熒光顯微鏡下觀察到帶熒光的細胞(轉染細胞),其熒光細胞暘性率80%左右,提示轉染成功;轉染T-bet的U937細胞,分彆經RT-PCR及westen-blot檢測到T-bet的mRNA和錶達的蛋白,而未經轉染或轉染對照質粒pIRES-eGFP的細胞,均未見目的基因的轉錄和蛋白錶達;T-bet轉染細胞的培養上清中含有較高水平的IFN-γ,而轉染前及對照質粒轉染的細胞IFN-γ的分泌水平極低.結論 通過電穿孔方法 成功將人T-bet基因轉染到白血病細胞株U937中,併檢測到大量IFN-γ的產生.T-bet是免疫應答調節的重要轉錄因子,對其研究將有助于進一步探討T-bet基因或其錶達產物作為Th1應答的調節劑用于臨床血液病治療的可能性.
목적 탐토인T-bet기인재백혈병세포주U937중적표체급기대IFN-γ분비적영향,심구통과면역조절개선백혈병환자궤체면역상태적가능성.방법 채용전천공기술장중조인pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)질립전염U937세포,RT-PCR검측전염전후U937세포T-bet적mRNA수평;westen-blot검측표체적T-bet단백;ELISA검측기분비IFN-γ적수평.시험중동시설립pIRES-eGFP질립위대조.결과 전천공전염U937세포후,재형광현미경하관찰도대형광적세포(전염세포),기형광세포양성솔80%좌우,제시전염성공;전염T-bet적U937세포,분별경RT-PCR급westen-blot검측도T-bet적mRNA화표체적단백,이미경전염혹전염대조질립pIRES-eGFP적세포,균미견목적기인적전록화단백표체;T-bet전염세포적배양상청중함유교고수평적IFN-γ,이전염전급대조질립전염적세포IFN-γ적분비수평겁저.결론 통과전천공방법 성공장인T-bet기인전염도백혈병세포주U937중,병검측도대량IFN-γ적산생.T-bet시면역응답조절적중요전록인자,대기연구장유조우진일보탐토T-bet기인혹기표체산물작위Th1응답적조절제용우림상혈액병치료적가능성.
