南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
1期
26-29
,共4页
孔令泉%蒲莹晖%马仕坤%涂刚%任国胜
孔令泉%蒲瑩暉%馬仕坤%塗剛%任國勝
공령천%포형휘%마사곤%도강%임국성
Western印迹%增强化学发光法%DAB化学显色法%印迹膜%快转法%慢转法
Western印跡%增彊化學髮光法%DAB化學顯色法%印跡膜%快轉法%慢轉法
Western인적%증강화학발광법%DAB화학현색법%인적막%쾌전법%만전법
目的 探讨快、慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用及各实验环节分析.方法 采用MDA-MB-231细胞制备细胞蛋白,应用不同印迹膜[硝酸纤维素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜]分别采用快转法和慢转法进行增强化学发光法(ECL)和DAB化学显色法检测,并对Western blotting的各实验环节进行了分析.结果 (1)在快、慢转法中硝纤膜的蛋白预染marker条带略强于尼龙膜,而尼龙膜又略强于PVDF膜;PVDF膜和尼龙膜的正反面易于混淆,而硝纤膜的正反面不易混淆.(2)在快、慢转法中,PVDF膜的DAB化学显色法图像略强于尼龙膜和硝纤膜,而尼龙膜和硝纤膜无明显差异;与慢转法相比,快转的硝纤膜和尼龙膜中的蛋白条带略呈波浪状.(3)在慢转法中三种膜化学发光法的图像无明显背景,但在快转法中尼龙膜的背景较明显,而硝纤膜和PVDF膜亦无明显背景.结论 应根据实验需要选用不同的印迹膜;慢转法通常优于快转法,增强化学发光法优于DAB化学显色法;增强化学发光法特异胜强、灵敏度高,是分析蛋白质表达较为理想的方法.
目的 探討快、慢轉法及不同濾膜和顯色檢測法在Western blotting中的應用及各實驗環節分析.方法 採用MDA-MB-231細胞製備細胞蛋白,應用不同印跡膜[硝痠纖維素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和暘離子尼龍膜]分彆採用快轉法和慢轉法進行增彊化學髮光法(ECL)和DAB化學顯色法檢測,併對Western blotting的各實驗環節進行瞭分析.結果 (1)在快、慢轉法中硝纖膜的蛋白預染marker條帶略彊于尼龍膜,而尼龍膜又略彊于PVDF膜;PVDF膜和尼龍膜的正反麵易于混淆,而硝纖膜的正反麵不易混淆.(2)在快、慢轉法中,PVDF膜的DAB化學顯色法圖像略彊于尼龍膜和硝纖膜,而尼龍膜和硝纖膜無明顯差異;與慢轉法相比,快轉的硝纖膜和尼龍膜中的蛋白條帶略呈波浪狀.(3)在慢轉法中三種膜化學髮光法的圖像無明顯揹景,但在快轉法中尼龍膜的揹景較明顯,而硝纖膜和PVDF膜亦無明顯揹景.結論 應根據實驗需要選用不同的印跡膜;慢轉法通常優于快轉法,增彊化學髮光法優于DAB化學顯色法;增彊化學髮光法特異勝彊、靈敏度高,是分析蛋白質錶達較為理想的方法.
목적 탐토쾌、만전법급불동려막화현색검측법재Western blotting중적응용급각실험배절분석.방법 채용MDA-MB-231세포제비세포단백,응용불동인적막[초산섬유소막、취편을희이불(PVDF)막화양리자니룡막]분별채용쾌전법화만전법진행증강화학발광법(ECL)화DAB화학현색법검측,병대Western blotting적각실험배절진행료분석.결과 (1)재쾌、만전법중초섬막적단백예염marker조대략강우니룡막,이니룡막우략강우PVDF막;PVDF막화니룡막적정반면역우혼효,이초섬막적정반면불역혼효.(2)재쾌、만전법중,PVDF막적DAB화학현색법도상략강우니룡막화초섬막,이니룡막화초섬막무명현차이;여만전법상비,쾌전적초섬막화니룡막중적단백조대략정파랑상.(3)재만전법중삼충막화학발광법적도상무명현배경,단재쾌전법중니룡막적배경교명현,이초섬막화PVDF막역무명현배경.결론 응근거실험수요선용불동적인적막;만전법통상우우쾌전법,증강화학발광법우우DAB화학현색법;증강화학발광법특이성강、령민도고,시분석단백질표체교위이상적방법.
