CAJ | 학술논문

目的对体外培养大鼠软骨细胞复制性老化行为进行观察,为进一步研究组织工程软骨退变机制,以及用药物干预并逆转其退变提供实验参考.方法 4周龄SD大鼠,体重185～200 g,断颈处死,分离培养软骨细胞,采用组织化学法检测传代培养的P1、P2、P3及P4代软骨细胞老化相关β-半乳糖苷酶,透射电镜观察细胞结构,免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达,阿力新蓝染色检测胞外基质硫酸糖胺多糖(sulfat-glycosaminoglycan,GAG)含量和分子结构,RT-PCR方法检测软骨细胞Ⅱ型胶原表达,流式细胞仪分析细胞周期及增殖指数(proliferative index,PI).结果 β-半乳糖苷酶检测:P1、P2代软骨细胞偶见阳性染色;P3代可见少数细胞阳性染色,与P1、P2代比较差异有统计学意义(P＜0.01);P4代与P1～P3代比较,阳性染色显著增加,差异有统计学意义(P＜0.01).透射电静镜观察:P1、P2代细胞胞浆内细胞器较多,胞核及核仁清晰,无凋亡软骨细胞;P3代细胞核浆比较大,胞浆内细胞器减少,胶原网络结构模糊不清;P4代细胞核浆比例增大,核固缩.P4代细胞G0/G1期含量增加(83.8%),而P1、P2及P3代分别为79.1%,79.2%,80.8%.P4代细胞PI为16.2%,P1、P2、P3代PI分别为20.9%、20.8%、19.2%.PCNA表达、GAG含量、长链分子百分比、Ⅱ型胶原表达减少等指标P4代与前代比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论体外培养的大鼠软骨细胞P4代出现老化.
목적 대체외배양대서연골세포복제성노화행위진행관찰,위진일보연구조직공정연골퇴변궤제,이급용약물간예병역전기퇴변제공실험삼고.방법 4주령SD대서,체중185～200 g,단경처사,분리배양연골세포,채용조직화학법검측전대배양적P1、P2、P3급P4대연골세포노화상관β-반유당감매,투사전경관찰세포결구,면역세포화학법검측증식세포핵항원(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)표체,아력신람염색검측포외기질류산당알다당(sulfat-glycosaminoglycan,GAG)함량화분자결구,RT-PCR방법검측연골세포Ⅱ형효원표체,류식세포의분석세포주기급증식지수(proliferative index,PI).결과 β-반유당감매검측:P1、P2대연골세포우견양성염색;P3대가견소수세포양성염색,여P1、P2대비교차이유통계학의의(P＜0.01);P4대여P1～P3대비교,양성염색현저증가,차이유통계학의의(P＜0.01).투사전정경관찰:P1、P2대세포포장내세포기교다,포핵급핵인청석,무조망연골세포;P3대세포핵장비교대,포장내세포기감소,효원망락결구모호불청;P4대세포핵장비례증대,핵고축.P4대세포G0/G1기함량증가(83.8%),이P1、P2급P3대분별위79.1%,79.2%,80.8%.P4대세포PI위16.2%,P1、P2、P3대PI분별위20.9%、20.8%、19.2%.PCNA표체、GAG함량、장련분자백분비、Ⅱ형효원표체감소등지표P4대여전대비교차이균유통계학의의(P＜0.01).결론 체외배양적대서연골세포P4대출현노화.