细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
10期
894-897
,共4页
易山%席晓蓉%施锐%杨芳%李敏%李鼎锋%孙茂盛
易山%席曉蓉%施銳%楊芳%李敏%李鼎鋒%孫茂盛
역산%석효용%시예%양방%리민%리정봉%손무성
HBsAg%GM-CSF%融合蛋白%毕赤酵母%免疫原性
HBsAg%GM-CSF%融閤蛋白%畢赤酵母%免疫原性
HBsAg%GM-CSF%융합단백%필적효모%면역원성
目的:利用毕赤酵母表达系统表达两种融合形式的乙肝病毒表面抗原(HBsAg-s和s-HBsAg),并对融合蛋白的免疫原性进行研究.方法:用毕赤酵母分泌型表达质粒pPIC9k为载体,通过PCR方法引入(Gly4Ser)3连接肽的编码基因将GM-CSF融合到HBsAg基因的3'端或5'端进行分泌表达,表达产物以SDS-PAGE及Western blot进行分析并通过DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱进行蛋白纯化.将纯化的两种融合蛋白与单纯的HBsAg蛋白分别免疫小鼠,ELISA方法检测HBsAg特异的抗体反应水平.结果:两种HBsAg/GMCSF融合蛋白均可在毕赤酵母菌株GS115中获得了分泌表达,Western blot分析表明表达产物能够与抗GM-CSF抗体及抗HBsAg抗体发生特异性结合.免疫后的血清ELISA结果显示,相比单纯的HBsAg蛋白,两种融合蛋白可以诱导出更高的抗体水平(P＜0.05),其中将GM-CSF蛋白融合在HBsAg蛋白的C端效果要好于融合在N端.结论:通过与GM-CSF蛋白的融合可以显著增强HBsAg的免疫原性,这为提高乙肝疫苗的免疫效果提供了新的思路与方法.
目的:利用畢赤酵母錶達繫統錶達兩種融閤形式的乙肝病毒錶麵抗原(HBsAg-s和s-HBsAg),併對融閤蛋白的免疫原性進行研究.方法:用畢赤酵母分泌型錶達質粒pPIC9k為載體,通過PCR方法引入(Gly4Ser)3連接肽的編碼基因將GM-CSF融閤到HBsAg基因的3'耑或5'耑進行分泌錶達,錶達產物以SDS-PAGE及Western blot進行分析併通過DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換柱進行蛋白純化.將純化的兩種融閤蛋白與單純的HBsAg蛋白分彆免疫小鼠,ELISA方法檢測HBsAg特異的抗體反應水平.結果:兩種HBsAg/GMCSF融閤蛋白均可在畢赤酵母菌株GS115中穫得瞭分泌錶達,Western blot分析錶明錶達產物能夠與抗GM-CSF抗體及抗HBsAg抗體髮生特異性結閤.免疫後的血清ELISA結果顯示,相比單純的HBsAg蛋白,兩種融閤蛋白可以誘導齣更高的抗體水平(P＜0.05),其中將GM-CSF蛋白融閤在HBsAg蛋白的C耑效果要好于融閤在N耑.結論:通過與GM-CSF蛋白的融閤可以顯著增彊HBsAg的免疫原性,這為提高乙肝疫苗的免疫效果提供瞭新的思路與方法.
목적:이용필적효모표체계통표체량충융합형식적을간병독표면항원(HBsAg-s화s-HBsAg),병대융합단백적면역원성진행연구.방법:용필적효모분비형표체질립pPIC9k위재체,통과PCR방법인입(Gly4Ser)3련접태적편마기인장GM-CSF융합도HBsAg기인적3'단혹5'단진행분비표체,표체산물이SDS-PAGE급Western blot진행분석병통과DEAE-Sepharose Fast Flow리자교환주진행단백순화.장순화적량충융합단백여단순적HBsAg단백분별면역소서,ELISA방법검측HBsAg특이적항체반응수평.결과:량충HBsAg/GMCSF융합단백균가재필적효모균주GS115중획득료분비표체,Western blot분석표명표체산물능구여항GM-CSF항체급항HBsAg항체발생특이성결합.면역후적혈청ELISA결과현시,상비단순적HBsAg단백,량충융합단백가이유도출경고적항체수평(P＜0.05),기중장GM-CSF단백융합재HBsAg단백적C단효과요호우융합재N단.결론:통과여GM-CSF단백적융합가이현저증강HBsAg적면역원성,저위제고을간역묘적면역효과제공료신적사로여방법.
