世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2007年
23期
2482-2486
,共5页
吴小力%张鹏%张琼%姚津剑%林菊生
吳小力%張鵬%張瓊%姚津劍%林菊生
오소력%장붕%장경%요진검%림국생
X染色体连锁凋亡抑制蛋白%短发夹状RNA%肝癌%逆转录聚合酶链式反应%免疫蛋白印迹
X染色體連鎖凋亡抑製蛋白%短髮夾狀RNA%肝癌%逆轉錄聚閤酶鏈式反應%免疫蛋白印跡
X염색체련쇄조망억제단백%단발협상RNA%간암%역전록취합매련식반응%면역단백인적
目的:设计以X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)为靶向的shRNA,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制XIAP表达的效应,筛选RNA干扰作用最强的shRNA片段.方法:设计4对针对XIAP基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达载体psiRNA-Hhneo-XIAP,通过脂质体介导的方法将重组质粒转染到肝癌细胞株HepG2细胞中.采用逆转录酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blotting)方法检测XIAP的mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达差异,以判断各sbRNA的干扰效应.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒.经质粒测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,XIAP基因的mRNA水平及蛋白表达水平明显下调,其中以1号重组质粒效应最强.shRNA作用48 h后,对HepG2细胞中XIAP mRNA和蛋白的抑制率与3,4号重组质粒相比,均具有显著性差异(mRNA:94.5%vs 81.5%,82.6%,均P＜0.01:蛋白:92.6% vs 80.7%,82.9%,均P＜0.01).结论:成功构建了携带以XIAP为靶向的shRNA的重组质粒,其对肝癌细胞内XIAP的表达具有显著抑制效应.
目的:設計以X染色體連鎖凋亡抑製蛋白(XIAP)為靶嚮的shRNA,構建攜帶此shRNA的重組質粒,檢測其抑製XIAP錶達的效應,篩選RNA榦擾作用最彊的shRNA片段.方法:設計4對針對XIAP基因不同位點的shRNA片段,構建攜帶此shRNA片段的真覈錶達載體psiRNA-Hhneo-XIAP,通過脂質體介導的方法將重組質粒轉染到肝癌細胞株HepG2細胞中.採用逆轉錄酶鏈式反應(RT-PCR)及蛋白印跡(Western blotting)方法檢測XIAP的mRNA及蛋白錶達情況,比較轉染前後其錶達差異,以判斷各sbRNA的榦擾效應.結果:成功構建含shRNA片段的重組質粒.經質粒測序證實,插入的DNA片段的序列與設計序列完全一緻.重組質粒轉染HepG2細胞後,XIAP基因的mRNA水平及蛋白錶達水平明顯下調,其中以1號重組質粒效應最彊.shRNA作用48 h後,對HepG2細胞中XIAP mRNA和蛋白的抑製率與3,4號重組質粒相比,均具有顯著性差異(mRNA:94.5%vs 81.5%,82.6%,均P＜0.01:蛋白:92.6% vs 80.7%,82.9%,均P＜0.01).結論:成功構建瞭攜帶以XIAP為靶嚮的shRNA的重組質粒,其對肝癌細胞內XIAP的錶達具有顯著抑製效應.
목적:설계이X염색체련쇄조망억제단백(XIAP)위파향적shRNA,구건휴대차shRNA적중조질립,검측기억제XIAP표체적효응,사선RNA간우작용최강적shRNA편단.방법:설계4대침대XIAP기인불동위점적shRNA편단,구건휴대차shRNA편단적진핵표체재체psiRNA-Hhneo-XIAP,통과지질체개도적방법장중조질립전염도간암세포주HepG2세포중.채용역전록매련식반응(RT-PCR)급단백인적(Western blotting)방법검측XIAP적mRNA급단백표체정황,비교전염전후기표체차이,이판단각sbRNA적간우효응.결과:성공구건함shRNA편단적중조질립.경질립측서증실,삽입적DNA편단적서렬여설계서렬완전일치.중조질립전염HepG2세포후,XIAP기인적mRNA수평급단백표체수평명현하조,기중이1호중조질립효응최강.shRNA작용48 h후,대HepG2세포중XIAP mRNA화단백적억제솔여3,4호중조질립상비,균구유현저성차이(mRNA:94.5%vs 81.5%,82.6%,균P＜0.01:단백:92.6% vs 80.7%,82.9%,균P＜0.01).결론:성공구건료휴대이XIAP위파향적shRNA적중조질립,기대간암세포내XIAP적표체구유현저억제효응.
