浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2007年
4期
331-336
,共6页
徐熠熠%蓝建平%朱园园%余建%来晓喻%孙洁%黄河
徐熠熠%藍建平%硃園園%餘建%來曉喻%孫潔%黃河
서습습%람건평%주완완%여건%래효유%손길%황하
蛋白质p53%细胞周期%肿瘤细胞,培养的%基因表达%有丝分裂%H1299细胞
蛋白質p53%細胞週期%腫瘤細胞,培養的%基因錶達%有絲分裂%H1299細胞
단백질p53%세포주기%종류세포,배양적%기인표체%유사분렬%H1299세포
目的:研究p53N端缺失突变体(301-393氨基酸)的绿色荧光融合蛋白p53301-393-GFP在p53阳性和阴性细胞中的定位以及对有丝分裂的影响.方法:免疫印迹检测突变体融合蛋白的表达.将野生型p53-GFP和p53301-393-GFP质粒,分别转染p53阳性细胞株HeLa和p53阴性细胞株H1299,观察各融合蛋白的细胞定位.观察转染突变体后H1299细胞生长情况,计数有丝分裂期的细胞数.HeLa细胞转染突变体后,流式细胞仪检测细胞周期,免疫印迹检测p53蛋白水平的改变.结果:p53301-393-GFP融合蛋白能正确表达.突变体在p53阳性和阴性细胞中都弥散定位于细胞核,但只在p53阳性细胞中才定位于核仁.p53301-393-GFP融合蛋白对H1299细胞的有丝分裂有明显的抑制作用,使进入有丝分裂期的细胞数量明显较对照组减少,且能够诱导凋亡.转染突变体的HeLa细胞产生G2/M期阻滞(P＜0.05),但是内源性p53蛋白水平无明显改变.结论:p53301-393-GFP突变体在p53阳性和阴性细胞中有不同的细胞定位,并能抑制细胞的有丝分裂,使细胞发生G2/M期阻滞.
目的:研究p53N耑缺失突變體(301-393氨基痠)的綠色熒光融閤蛋白p53301-393-GFP在p53暘性和陰性細胞中的定位以及對有絲分裂的影響.方法:免疫印跡檢測突變體融閤蛋白的錶達.將野生型p53-GFP和p53301-393-GFP質粒,分彆轉染p53暘性細胞株HeLa和p53陰性細胞株H1299,觀察各融閤蛋白的細胞定位.觀察轉染突變體後H1299細胞生長情況,計數有絲分裂期的細胞數.HeLa細胞轉染突變體後,流式細胞儀檢測細胞週期,免疫印跡檢測p53蛋白水平的改變.結果:p53301-393-GFP融閤蛋白能正確錶達.突變體在p53暘性和陰性細胞中都瀰散定位于細胞覈,但隻在p53暘性細胞中纔定位于覈仁.p53301-393-GFP融閤蛋白對H1299細胞的有絲分裂有明顯的抑製作用,使進入有絲分裂期的細胞數量明顯較對照組減少,且能夠誘導凋亡.轉染突變體的HeLa細胞產生G2/M期阻滯(P＜0.05),但是內源性p53蛋白水平無明顯改變.結論:p53301-393-GFP突變體在p53暘性和陰性細胞中有不同的細胞定位,併能抑製細胞的有絲分裂,使細胞髮生G2/M期阻滯.
목적:연구p53N단결실돌변체(301-393안기산)적록색형광융합단백p53301-393-GFP재p53양성화음성세포중적정위이급대유사분렬적영향.방법:면역인적검측돌변체융합단백적표체.장야생형p53-GFP화p53301-393-GFP질립,분별전염p53양성세포주HeLa화p53음성세포주H1299,관찰각융합단백적세포정위.관찰전염돌변체후H1299세포생장정황,계수유사분렬기적세포수.HeLa세포전염돌변체후,류식세포의검측세포주기,면역인적검측p53단백수평적개변.결과:p53301-393-GFP융합단백능정학표체.돌변체재p53양성화음성세포중도미산정위우세포핵,단지재p53양성세포중재정위우핵인.p53301-393-GFP융합단백대H1299세포적유사분렬유명현적억제작용,사진입유사분렬기적세포수량명현교대조조감소,차능구유도조망.전염돌변체적HeLa세포산생G2/M기조체(P＜0.05),단시내원성p53단백수평무명현개변.결론:p53301-393-GFP돌변체재p53양성화음성세포중유불동적세포정위,병능억제세포적유사분렬,사세포발생G2/M기조체.
