CAJ | 학술논문

根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成人白细胞介素4基因,以pET30a(+)为载体构建了重组表达质粒pET30a(+)/rhIL-4,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达并超声破菌检测重组蛋白的表达形式.采用5L发酵罐培养工程菌,发酵液OD600为0.6时诱导3.5 h收集菌体,检测目的蛋白的表达量.收集的菌体经压榨破菌获得包涵体,通过包涵体变性、层析、透析复性等方法对rhIL-4进行纯化.采用人红细胞白血病细胞(TF-1)测定纯化的rhIL-4的生物活性.测序表明目的基因已插入载体pET30a(+)中,重组蛋白以包涵体形式表达,单位体积重组蛋白的表达量达200mg/L发酵液,建立了对包涵体形式表达的rhIL-4纯化方法,最终得率为40mg/L发酵液,纯度大于98%,回收率为20%以上.免疫印迹法检测诱导表达的重组蛋白和纯化的蛋白为IL-4,N端氨基酸序列测定结果与理论相符,生物活性检测纯化的蛋白比活性达2.5×106 AU/mg.这为rhIL-4进一步产业化研究建立了基础.
근거대장간균밀마자편애성우화병합성인백세포개소4기인,이pET30a(+)위재체구건료중조표체질립pET30a(+)/rhIL-4,장중조질립전화대장간균BL21(DE3)감수태세포,유도표체병초성파균검측중조단백적표체형식.채용5L발효관배양공정균,발효액OD600위0.6시유도3.5 h수집균체,검측목적단백적표체량.수집적균체경압자파균획득포함체,통과포함체변성、층석、투석복성등방법대rhIL-4진행순화.채용인홍세포백혈병세포(TF-1)측정순화적rhIL-4적생물활성.측서표명목적기인이삽입재체pET30a(+)중,중조단백이포함체형식표체,단위체적중조단백적표체량체200mg/L발효액,건립료대포함체형식표체적rhIL-4순화방법,최종득솔위40mg/L발효액,순도대우98%,회수솔위20%이상.면역인적법검측유도표체적중조단백화순화적단백위IL-4,N단안기산서렬측정결과여이론상부,생물활성검측순화적단백비활성체2.5×106 AU/mg.저위rhIL-4진일보산업화연구건립료기출.